产品描述

A-769662是一种有效的，可逆的AMPK激活剂，在无细胞试验中EC50为0.8 μM，对GPPase/FBPase活性几乎没有作用。

靶点（IC50 & Targe）

AMPK,0.8μM(EC50)

FAS,3.2μM

体外研究

A-769662部分刺激纯化的大鼠肝脏AMPK，EC50 为0.8 μM。A-769662以剂量响应的方式激活从多种组织和物种纯化得到的AMPK，伴随不同的EC50s。A-769662的EC50s，使用从大鼠心脏，大鼠肌肉，或人胚肾细胞(HEKs)部分纯化的AMPK测定，结果分别为2.2 mM，1.9 mM，或1.1 mM。原代大鼠肝细胞用A-769662处理4小时剂量依赖性增加ACC磷酸化，其与脂肪酸合成的抑制相关，IC50为3.2 μM。A-769662也会抑制小鼠肝细胞中脂肪酸合成，IC50为3.6 μM。[1] A-769662通过变构调节和抑制AMPK在Thr-172上的去磷酸化作用激活AMPK，类似于AMP的作用。[2] A-769662通过与AMPK无关的作用机制抑制蛋白酶体功能。 A-769662影响纯化26S蛋白酶体的体外活性，但是不影响纯化20S蛋白酶体的体外活性。A-769662对MEF细胞具有毒性作用。[3]一项最近的研究表明，A-769662抑制细胞增殖和DNA合成。[4]

体内研究

A-769662对正常Sprague Dawley大鼠的短期治疗降低肝脏丙二酰CoA水平，和换气比值，VCO2/VO2，表明整体脂肪酸氧化比率增加。A-769662(30 mg/kg, b.i.d.)治疗ob/ob小鼠，减少PEPCK，G6Pase，和FAS的肝脏表达，降低40%血浆葡萄糖，减少体重增加，并显著降低血浆和肝脏甘油三酯水平。[1]

激酶实验

96-孔 AMPK 试验:

AMPK活性通过监测SAMS多肽底物(标准试验中为20 mM，附加试验中为100 mM)磷酸化根据前述方案(Anderson et al., 2004)测量。为测定 A-769662诱导的AMPK活化是否可逆，AMP或A-769662与大鼠肝脏AMPK在20倍标准试验浓度下预培养10分钟，然后稀释并测量AMPK活性。

细胞实验

Cell lines: MEF细胞

Concentrations: 300 μM

Incubation Time: 24小时

Method: A-769662处理或未处理的MEF细胞的细胞活性如下进行测定：细胞通过胰蛋白酶化采集，并与0.5 mg/mL RNase 和50 μg/mL碘化丙啶在室温下黑暗中进行培育；细胞活性通过流式细胞术使用FACScanto流式细胞分析仪分析，激发激光波长为488 nm，碘化丙啶荧光检测波长为600 nm。为测定细胞周期各阶段的细胞比例，细胞通过胰蛋白酶化采集，通过离心收集，用PBS洗涤，并在80%乙醇中于-20°C固定过夜。随后，将这些固定的细胞离心以除去固定剂，并于黑暗中，室温下，在包含0.5 mg/mL RNase 和50 μg/mL碘化丙啶的PBS中培养20分钟。流式细胞术分析如上进行。G1，S，和G2期的细胞比例使用MODFIT程序测定。细胞培养照片在指示时间使用结合具有20倍物镜的倒置显微镜的相机拍摄。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: Sprague Dawley大鼠

Formulation: A-769662溶解在DMSO中

Dosages: 30 mg/kg

Administration: 腹腔注射给药

(Only for Reference)

参考文献

[1] Cool B, et al, Cell Metab, 2006, 3(6), 403-416.

[2] Sanders MJ, J Biol Chem, 2007, 282(45), 32539-32548.

[3] Moreno D, et al, FEBS Lett, 2008, 583(17), 2650-2654.

[4] Pevton KJ, et al, J Pharmacol Exp Ther, 2012, Jun 13.