产品描述

MK-2206 2HCl是一种高度选择性的Akt1/2/3抑制剂，在无细胞试验中IC50分别为8 nM/12 nM/65 nM；对250种其他蛋白激酶没有抑制活性。Phase 2。

靶点（IC50 & Targe）

Akt1,8 nM (cell free)

Akt2,12 nM (cell free)

Akt3,65 nM (cell free)

体外研究

MK-2206是变构抑制剂，由pleckstrin同源结构域激活。MK-2206抑制Akt的苏氨酸308位点和丝氨酸473位点的自身磷酸化作用。另外，MK-2206阻止Akt调节的下游信号分子（包括TSC2, PRAS40，及核糖体S6蛋白）的磷酸化作用。与抑制Ras 突变型细胞系(如NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299, 和Calu-6)相比，MK-2206 更有效地抑制Ras野生型细胞系(如A431, HCC827, 和NCI-H292)。MK-2206和细胞毒素药剂如erlotinib 和lapatinib联用作用于肺部NCI-H460肿瘤细胞或者卵巢A2780肿瘤细胞，MK-2206也显示出协同效应。[1]

体内研究

MK-2206和这些细胞毒素药剂联用作用于NCI-H292移植瘤，MK-2206显示出非常有效的抗癌活性。卵巢癌A2780移植瘤中，按动物体重，每千克处理240mg MK-2206,则可抑制70%以上的Akt1/2在苏氨酸308位点和丝氨酸473位点的磷酸化，导致肿瘤生长抑制率达到60%。[1]

激酶实验

Akt激酶实验:

通过得到的GSK 生物素肽段基质测定Akt激酶。使用含镧系金属螯合物偶联单抗的均相时间分辨荧光(HTRF)测定肽段磷酸化程度，这种单抗专门作用于与链霉亲和素——藻蓝素(SA-APC)载体相结合的磷酸化作用，SA-APC载体可以结合到肽段的部分生物素上。当镧系金属螯合物与藻蓝素相接触时，无辐射的能量从镧系金属螯合物传递给藻蓝素，然后藻蓝素发射波值为655纳米的光线。工作液:100X 蛋白酶抑制剂混合物(PIC)：1mg/ml苯甲脒，0.5 mg/ml 抑肽素, 0.5 mg/ml亮抑肽酶, 0.5 mg/ml 抑肽酶。10X实验 buffer: 500 mM HEPES（pH 为7.5）, 1% PEG, 16.6 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% BSA, 20 mM 9-甘油磷酸。抑制 buffer：50 mM HEPES（pH为7.3）, 16.6 mM EDTA, 0.1% BSA, 0.1% Triton X-100, 0.17 nM 标记的单抗, 0.0067mg/ml SA-APC。ATP/MgCl2工作液: 1X 实验buffer, 1 mM DTT, 1X PIC, 5% 甘油, 激活的Akt。肽段工作液：1X实验buffer, 1 mM DTT, 1X PIC, 5% 甘油 2 TM GSK生物素肽段。工作液加到合适的孔中，然后加入总负荷为16的 ATP/MgCl2，反应开始。含MK-2206的实验组和对照组加入总负荷为10的肽段工作液。然后加入总负荷为13的酶液，混匀。反应进行50分钟，然后加入总负荷为60的均相时间分辨荧光抑制buffer停止反应。阻断的反应在室温下温育30分钟以上，然后使用仪器读数。

细胞实验

Cell lines: A431, HCC827, NCI-H292, NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299, Calu-6,和NCI-H460细胞

Concentrations: 0, 0.3, 1,和3 μM

Incubation Time: 72或96小时

Method:MK-2206溶解在DMSO中，在实验使用前用培养基稀释。细胞按2~3×103密度接种在96孔板上，温育24小时。MK-2206 (分为0, 0.3, 1,和3 μmol四组)处理细胞，72或者96小时后，测定细胞增殖情况。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 携带SK-OV-3, NCI-H292, HCC70, PC-3,和NCI-H460模型的雄性CD1裸鼠

Formulation: 30% Captisol

Dosages: 120 mg/kg

Administration: 口服处理

(Only for Reference)

参考文献

[1] Yan L, AACR Annual Meeting 2009: Abstract Number: DDT01-1.

[2] Hirai H, et al. Mol Cancer Therapy, 2010, 9(7), 1956-1967.

[3] Cheng Y, et al, Cancer Res, 2011, 71(7), 2654-2663.

[4] WO2008070016 (A2)