产品描述

PP121是一种作用于PDGFR， Hck， mTOR， VEGFR2， Src和Abl的多靶点抑制剂，IC50分别为2 nM， 8 nM， 10 nM， 12 nM， 14 nM和18 nM，也抑制DNA-PK，IC50为60 nM。

靶点（IC50 & Targe）

Hck,8nM

mTOR,13nM

PDGFR,2nM

Src,14nM

VEGFR,12nM

体外研究

PP-121在酪氨酸激酶和PI3Ks而不是丝-苏氨酸激酶保守的疏水性口袋中选择性相互作用。PP-121在Src处与Glu310形成氢键，有效取代催化赖氨酸的结构作用，且导致产生螺旋C的顺序和活性构象的稳定性。PP-121抑制一些 PI3Ks，包括p110α, DNA-PK 和mTOR，IC50分别为 52 nM, 60 nM 和 10 nM。PP-121抑制一些酪氨酸激酶，包括 Bcr-Abl, Hck, Src, VEGFR2 和PDGFR，IC50 分别为 18 nM, 8 nM, 14 nM, 12 nM 和2 nM。PP-121 浓度为0.04 到 10 µM时，作用于两种胶质瘤细胞系，U87和LN229。有效抑制Akt, p70S6K 和S6磷酸化，这种作用存在剂量依赖性。PP-121浓度为 0.04 到10 µM 时，通过直接对PI3Ks 和 mTOR抑制，而有效抑制一系列肿瘤细胞增殖。PP-121作用于LN220, U87 和Seg1细胞，诱导细胞在G0/G1期停滞。PP-121浓度为0.08 到20 µM时，作用于转化v-Src(Thr338)的NIH3T3 细胞，抑制v-Src诱导的酪氨酸磷酸化。PP-121浓度为 2.5 µM 时，作用于转化v-Src(Thr338)的NIH3T3细胞，恢复肌动蛋白纤维的染色。PP-121 浓度低到40 nM时，作用于表达C634W致癌基因 Ret突变35的TT甲状腺癌细胞，抑制Ret自磷酸化。PP-121抑制 TT 甲状腺癌细胞增殖,IC50为50 nM。PP-121作用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，抑制VEGF刺激的细胞增殖，IC50 为 41 nM。PP-121直接抑制Bcr-Abl诱导的酪氨酸磷酸化，作用于K562细胞，导致产生药物诱导的凋亡，而作用于表达Bcr-Abl的BaF3细胞，诱导凋亡，且诱导细胞周期停滞。[1]

激酶实验

激酶检测:

在 10 µM ATP, 2.5 µCi γ-32P-ATP 和底物存在时，纯化的激酶域与PP-121的2或4倍稀释液（浓度范围为1nM-50 µM）或0.1% DMSO（空白对照）温育。通过点样到硝酸纤维素膜或磷酸纤维素膜上终止反应，然后冲洗膜5–6次，移除未结合的放射性，然后烘干。通过磷光法量化放射性，然后使用 Prism软件，拟合数据到S型剂量反应，而计算IC50值。

细胞实验

Cell lines: U87, LN229, NIH3T3, HUVECs, BaF3 和 TT 甲状腺癌细胞

Concentrations: 0.04 μM - 20 ?

Incubation Time: 24-72 小时

Method: 用于western blot分析时,细胞生长在 12孔板中，然后使用指定浓度 PP-121 或0.1% DMSO处理。处理的细胞裂解，裂解物使用SDS-PAGE溶解，然后转移到硝酸纤维素上进行印迹。细胞增殖研究中，细胞生长在96孔板上，使用PP-121的 4倍稀释液 (10 µM-0.040 μM) 或0.1% DMSO处理。72小时后，使用 Resazurin钠盐(22 µM) 处理细胞，然后测定荧光。使用Prism软件测定IC50值。细胞增殖研究中，涉及计数单细胞，非粘着细胞按低密度(3–5% 汇合度)接种，然后使用PP-121(2.5 µM)或 0.1% DMSO处理。每天细胞稀释到台酚蓝中，然后使用血球计数仪测定活细胞数。细胞凋亡和细胞周期研究中，使用指定浓度 PP-121或0.1% DMSO处理细胞24–72小时。使用AnnexinV-FITC对细胞进行染色，或使用乙醇固定，然后使用碘化丙啶染色。 使用 FacsCalibur 流式细胞仪分开细胞群，使用CellQuest Pro软件收集数据，然后使用 ModFit 或FlowJo软件分析。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Apsel B, et al. Nat Chem Biol, 2008, 4(11), 691-699.