闵俊哲教授科研成果｜氨基官能团手性化合物的荧光“拆分利器”-DBD-M-Pro-百灵威

由于大多数手性代谢物缺乏生色基团，因此使用荧光手性试剂进行衍生化是改善分离和获得高灵敏度检测的常用方法。延边大学闵俊哲教授开发了一种新型荧光衍生化试剂DBD-M-Pro，试剂本身带有荧光基团及一个手性中心结构，可靶向标记带有氨基官能团手性化合物，是一种新型高灵敏度的荧光手性衍生化试剂。同时后期研究表明DBD-M-Pro也可提高氨基手性化合物在质谱中的检测灵敏度，亦是一种良好的质谱衍生化试剂。
闵俊哲教授团队在初期研究中，采用超高效液相色谱结合荧光 (UPLC-FL)对DBD-M-Pro的拆分效能进行考察。结果表明DBD-M-Pro可在反相C₁₈柱实现17种-DL氨基酸的手性分离，Rs值在1.59 ~ 24.11之间，具有较强的手性选择性。并利用UPLC-FL测定了40名健康志愿者 (15名男性和25名女性) 唾液中DL-氨基酸的含量和D/L-氨基酸的比值，发现男性唾液中D-Pro的含量高于女性 (p < 0.05)，女性唾液中D-Lys的含量显著高于男性 (p < 0.001)，同时五种D/L-氨基酸比值 (Val, Phe, Trp, Pro, Leu) 在男性和女性具有明显差异 (p < 0.01)。研究证明DBD-M-Pro可显著提高衍生化产物的荧光灵敏度，并为生物样本中氨基手性代谢物的痕量分析提供了一种新策略。
人体头发作为采集与储存简便、低侵袭性、能反映机体长期健康状态的新生物样品备受关注，但其中的游离手性氨基酸与代谢疾病的相关性研究鲜有报道。基于此，闵俊哲教授团队利用DBD-M-Pro，建立了一种基于UHPLC-HRMS同时分析头发样本中游离手性氨基酸的新方法，并将其应用于30名健康志愿者 (HVs) 和30名糖尿病患 (DPs) 头发样本中游离手性氨基酸的浓度检测。男性糖尿病患者头发中L-Thr、L-Val、L-Leu (p < 0.05)和D-Ala (p < 0 01)水平显著高于男性健康志愿者，女性糖尿病患者头发中D-Ala (p < 0.05)水平显著高于女性健康志愿者。这项研究证明DBD-M-Pro亦可提高衍生化产物在质谱中的检测灵敏度，并首次证实了利用人体头发中的游离DL-氨基酸作为潜在的糖尿病生物标志物的可行性。^[1]

产品优势

• 纯度高：98%；
• 分离度高：DBD-M-Pro与17个氨基酸和苯乙胺（PEA）在1.59–24.11范围内实现完全分离（图1）；
• 适用性强：亦可作为质谱探针使用，在质谱中断裂出特定碎片离子，提高质谱响应（图2）；
• 灵敏度高：可应用于生物样本中游离DL-氨基酸的痕量分析（图1，图3）；

图1UPLC-FL chromatograms of simultaneous separation derivative DL-amino acids with DBD-M-Pro.^[1]
Mobile phase I: 10 mM CH₃COONH₄–0.05% FA in H₂O (pH 3)/0.1% FA in CH₃CN.^[1]
Mobile phase II: 10 mM CH₃COONH₄–0.05% FA in H₂O (pH 3)/0.1% FA in CH₃OH.^[1]

图2 Changes in response intensities of the seven DL-amino acid and internal standard derivatives under different CE values, proposed fragmentation pattern and theoretical m/z of each amino acid.^[1]

图3 Representative UHPLC-HRMS EICs of the seven DL-amino acids. A: Standards of amino acids; B: Hair of healthy volunteers.^[1]

百灵威独家提供延边大学教授-闵俊哲科研成果—— DBD-M-Pro

产品编号：9426277

保存条件：4℃

品名	CAS	货号
4-(N,N-dmethylaminosulfonyl)-2,1,3-benzoxadiazole-trans-2-methyl-L-proline (DBD-M-Pro), 98% DBD-反式-2-甲基-L-脯氨酸	/	9426277

个人简介

闵俊哲，药学博士，教授，博士生导师，药物分析学科带头人，吉林省百名高层次创新创业人才、图们江学者、西部之光访问学者、全国药物分析技术分会常务委员。日本静冈县立大学客座教授，Frontiers in chemistry杂志副主编。现主要致力于手性代谢组学、糖组学高灵敏度质谱探针的开发及应用；中药/民族药复方制剂的作用机理研究；慢性疾病早期预警及诊断用非侵袭性试剂盒的开发。在日本任教期间主持完成日本文部科学省项目3项（相当于中国面上项目2项，重点项目1项），其他财团、日本科学技术振兴机构项目等共3项。现主持和完成国家自然科学基金项目4项，省部级项目4项。发表SCI论文130余篇，已授权发明专利6项（日本3项，中国3项）。已培养“青年图们江学者”等优秀博士毕业生十余名。

参考文献

Li,X.L.,Han,Y.,Huang,Y.,Sun,X.,Xiao,S., & Min, J. Z. (2022). Highly sensitive novel fluorescent chiral probe possessing (S)-2-methylproline structures for the determination of chiral amino compounds by ultra-performance liquid chromatography with fluorescence: An application in the saliva of healthy volunteer. Journal of chromatography. A,1661, 462672.
Wang, X., Sun, X., Jin, Y., Cheng, S., Han, Y., Zhang, M., Zhang, L., Li, X. L., Xu, C. Y., & Min, J. Z. (2023). Development and evaluation of a novel fluorescent chiral derivatization reagent DBD-S-M-Pro: first observation of four chiral amino acids in human hair. Analytical methods: advancing methods and applications, 15(7), 884–895.
Wang, S., Zhou, X., Wang, X., Cheng, S., Li, X. L., Nan, J., & Min, J. Z. (2024). Simultaneous determination of free DL-amino acids in human hair with a novel DBD-M-Pro derivatization by UHPLC-HRMS: An application in diabetes patients. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 251, 116425.