产品描述

Vemurafenib (PLX4032, RG7204)是一种新型有效的B-RafV600E抑制剂，IC50为31 nM。Vemurafenib对B-RafV600E的选择性比对野生型B-Raf的选择性高10倍，在细胞实验中，选择性可高100倍以上

靶点（IC50 & Targe）

ACK1,19 nM (cell free)

BLK,547nM

B-Raf,100nM

B-Raf (V600E),31 nM (cell free)

BRK,213nM

C-Raf,48nM

CSK,2.339μM

FGR,63nM

FRK (PTK5),1.884μM

Lck,183nM

Lyn B,599nM

MAP4K5 (KHS1),51nM

MNK2,1.717μM

NEK11,317nM

Src,2.389μM

SRMS,18 nM (cell free)

WNK3,877nM

Yes1,604nM

c-Raf-1,48 nM (cell free)

体外研究

PLX4032抑制B-RAFV600E, C-RAF, 和 野生型B-RAF, IC50分别为31 nM, 48 nM, 和100 nM。PLX4032 也抑制一些非-RAF激酶,包括ACK1, KHS1,和SRMS, IC50 为18 nM 到51 nM。[1] PLX4032作用于黑色素瘤细胞系，抑制效果依赖于B-RAF突变状态，因为PLX4032有效抑制含B-RAFV600突变的细胞, 包括V600E, V600D, V600K, 和V600R, 但是对野生型或其他突变没有作用效果。PLX4032作用于MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28, 和A2058细胞时，IC50为20 nM 到 1 μM。0.1 μM 到30 μM PLX4032 也抑制MEK1/2 和ERK1/2磷酸化作用。[2] PLX4032高效作用于黑色素瘤的治疗 ，因为PLX4032有效抑制B-RAFV600E。PLX4032作用于结肠癌细胞，抑制B-RAF V600E导致 EGFR激活的快速回应，可用于补偿PLX4032抑制的细胞增殖。[3]

体内研究

PLX4032按6 mg/kg-20 mg/kg 剂量作用于B-RAFV600E-突变鼠移植瘤模型，抑制肿瘤生长。[1] PLX4032按12.5 mg/kg-100 mg/kg剂量作用于携带LOX, Colo829, 和A375移植瘤小鼠，抑制肿瘤生长，延长小鼠寿命。[2]

激酶实验

RAF激酶活性测定:

通过测量生物素化的BAD蛋白磷酸化而测定野生型RAF和突变型的激酶活性。在20 mM Hepes (pH 7.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% (v/v) Tween-20, 50 nM 生物素-BAD 蛋白，和 1 mM ATP 的混合物中室温下进行反应。加入5 μL 含20 mM Hepes (pH 7.0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA, 0.3% (w/v) 牛血清蛋白 (BSA)的溶液，5分钟后，反应终止。终止溶液也包含p-BAD (Ser112) 抗体,链霉亲和素包被的供体小珠，蛋白A 受体小珠。抗体和小珠在终止溶液中黑暗环境下室温预温育30分钟。 最终抗体被稀释2000倍，每个小珠的终浓度为10 μg/mL。重复做三次单独纯化蛋白实验，去不同两批的平均值作为突变活性。

细胞实验

Cell lines: MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28, 和 A2058 细胞

Concentrations: 0–10 μM , 溶于 DMSO

Incubation Time: 5 天

Method:通过MTT 实验测评细胞增殖。细胞按每孔1000到5000个接种在96孔板上，体积为180 μL。PLX4032按最终实验浓度的10倍储备在含1% DMSO的培养基中。细胞接种24小时后, 加入20 μL适当稀释的PLX4032。接种6天后，进行增殖实验。计算抑制百分数，根据抑制百分数与浓度的对数的回归分析测定IC50值。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 携带LOX, Colo829, 和A375移植瘤细胞的无胸腺裸鼠

Formulation: 配制成微沉淀散粉 (MBP), 按指定浓度悬浮在含2% Klucel LF的水溶液中，然后使用HCl调节pH为4

Dosages: 12.5 mg/kg–100 mg/kg

Administration: 口服饲喂，每天两次

(Only for Reference)

参考文献

[1] Bollag G, et al. Nature, 2010, 467(7315), 596-599.

[2] Yang H, et al. Cancer Res, 2010, 70(13), 5518-5527.

[3] Prahallad A, et al. Nature, 2012, 483(7387), 100-103.

[4] Kumar A, et al. J Mol Biol, 2005, 348(1), 183-193.

[5] Yang H, et al. Cancer Res, 2012, 72(3), 779-789.