产品描述

AG-18抑制EGFR，IC50为35 μM。

靶点（IC50 & Targe）

EGFR,35μM

体外研究

AG 18抑制EGFR和IR，Ki分别为11 μM 和 12 mM。AG 18作用于A431 细胞，抑制EGF诱导的EGFR自磷酸化，IC50为15 μM。[1]AG 18 (10 μM)抑制EGF诱导的GH3细胞增殖。AG 18(10 μM)现在抑制10 nM 和 1 μM Ghrelin诱导的细胞增殖。AG 18(10 μM) 作用于GH3细胞，抑制Ghrelin刺激的ERK1/2磷酸化增加。[2]AG18作用于原代培养的星形胶质细胞，抑制体积敏感的[3H]牛磺酸释放，这种作用存在剂量依赖性。AG18激活肿胀引起的体积依赖性的D-[3H]天冬氨酸从原代星形胶质细胞培养物中释放。[3]AG 18(300 μM)作用于A549上皮细胞，抑制TPA诱导的ICAM-1表达刺激，这种作用存在剂量依赖性。AG 18(300 μM)作用于A549 上皮 细胞，也抑制TPA刺激的NF-kappaB DNA-蛋白结合和ICAM-1 启动子活性。AG 18(100 μM)作用于A549上皮细胞，抑制TNF-alpha和TPA刺激的IKK活性。[4]AG 18(10 μM)作用于颈动脉，降低4倍5-HT的效力，且降低对5-HT的最大收缩。AG 18(10 μM)转移2倍KCl诱导的收缩，且产生最大显著抑制作用。[5]

激酶实验

EGF受体自磷酸化检测:

来自A431细胞的WGA纯化的EGF受体(每组实验0.5 μg) 使用EGF(800 nM)在4°C下激活20分钟。加入Mg(Ac)2 (60 mM), Tris-Mes buffer, pH 7.6 (50 mM), 和[32P]ATP (20 pM, 每组实验5 μCi/)开始反应。在4°C或15°C下进行反应，加入SDS样品缓冲液(10% 甘油, 50 mM Tris, pH 6.8, 5% β-巯基乙醇, 和 3% SDS)终止反应。样品在8% SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE) (从30％丙烯酰胺和0.8％双-（丙烯酰胺）中制得，含有0.375 M Tris, pH 8.8, 0.1% SDS, 0.05% TEMED,和0.46% 过硫酸铵)上跑胶。烘干凝胶，使用Agfa Curix RP2 X-射线胶片进行放射自显影。有关的放射性带被切断，并按Cerenkov模式计数。自磷酸化的快速阶段又持续了10分钟。在15°C下第一个10秒完成的磷酸化的程度包括总的自磷酸化信号的三分之一，可能反映了受体第一部位的磷酸化。因此，10秒间隔被选择用于随后的自磷酸化实验。

细胞实验

Cell lines: GH3细胞

Concentrations: 10 μM

Incubation Time: 0.5 小时

Method: GH3细胞按每孔5×104个细胞接种在含2％活性炭处理的FCS，和各种浓度的Ghrelin，和PMA或EGF的培养基中72小时，然后每孔加入2 μCi [3H]胸甘再进行6小时。按24小时，48小时和72小时的时间过程进行，用于Ghrelin刺激，选择72小时用于进一步的实验。研究也用于调查大鼠Ghrelin 或 Desoctanoyl-Ghrelin诱导的细胞增殖的影响，及U0126, GF109203X, AG 18, Wortmannin 和 H-89对Ghrelin诱导的MAPK刺激的影响。加入10 μM AG 18 30分钟后，进行处理。收集细胞，使用Microbeta 1450计数器，在闪烁液存在下，进行计数。实验至少重复3次。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Gazit A, et al. J Med Chem, 1989, 32(10), 2344-2352.

[2] Nanzer AM, et al. Eur J Endocrinol, 2004, 151(2), 233-240.

[3] Mongin AA, et al. Am J Physiol, 1999, 276(5 Pt 1), C1226-1230.

[4] Chen C, et al. Cell Signal, 2001, 13(8), 543-553.