产品描述

NMS-873是特异性p97的变构抑制剂，IC50=30nM，对VCP/p97的选择性相对于对其他AAA ATPase、Hsp90和其他所检测激酶较高。

靶点（IC50 & Targe）

p97,30nM

体外研究

NMS-873降低p97对胰蛋白酶消化的敏感性，防止连接器D2域的退化。NMS-873，作为p97抑制剂，产生对各种血液的和固体肿瘤系的抗增殖活性。作用机制研究表明，NMS-873激活未折叠蛋白反应，干扰自噬，从而诱导癌症细胞死亡。[1]

激酶实验

生化检测和高通量筛选:

ATPase活性和重组野生型VCP与其突变体的动力学参数通过检测反应中ADP的形成评估，使用修改的NADH偶联测定法。ADP和NADH是VCP ATPase活性的ATP竞争性抑制剂，NADH偶联测定法的标准协议被修改为两个步骤。在第一部分，ATP产生系统(40 U/ml 丙酮酸激酶和3 mM 磷酸烯醇丙酮酸盐)回收VCP活动产生的ADP，保持底物浓度恒定(因此防止产物抑制)，并积累化学计量的丙酮酸盐。在第二部分，VCP酶反应用30 mM EDTA 和250 μM NADH淬灭，并被40 U/ml乳酸脱氢酶以化学计量氧化以减少积累的丙酮酸盐。NADH浓度的减少在340 nm下使用Tecan Safire 2阅读板进行测定。该测试在96孔或384孔UV板上在含有50 mM Hepes，pH 7.5，0.2毫克/毫升BSA，10 mM MgCl2 和 2 mM DTT的反应缓冲液中进行。实验数据符合协同方程式，得到的Ks*大约为60 μM，和希尔系数为2.0 ± 0.1。对1亿化合物库的高通量筛选以1,536孔格式的微型试验进行，并使用更灵敏的ADP检测系统，Transcreener ADP FP。加入10 μM ATP到反应中后，对10 nM VCP 和 10 μM抑制剂预培养20分钟，其在淬灭前允许进行90分钟。筛选的平均Z

细胞实验

Cell lines: 各种各样的血液和实体肿瘤系

Concentrations: ~10 μM

Incubation Time: 72小时

Method:细胞以1,600细胞每孔接种于384孔白色透明底平板。接种后24小时，细胞用化合物(每种化合物，重复两份，稀释成8个不同浓度)进行处理，并在37 °C下于5% CO2大气中再培育72小时。然后将细胞裂解，每孔中ATP含量通过基于热稳定的萤火虫荧光素酶检测，作为细胞活性的量度来确定。IC50值使用处理过的细胞相对于未处理过的对照组的生长百分比来计算

(Only for Reference)

参考文献

[1] Magnaghi P, et al. Nat Chem Biol. 2013, 9(9), 548-556.