产品描述

UNC1215是一种有效的，选择性MBT (恶性脑瘤)拮抗剂，与L3MBTL3结合， IC50为40 nM，Kd为120 nM，比作用于人类MBT家族其他成员选择性高50倍。

靶点（IC50 & Targe）

L3MBTL3,40nM

L3MBTL3-D274A,3.5μM

体外研究

UNC1215与L3MBTL3结合,竞争性置换含单或二甲基赖氨酸的肽段。这种探针比作用于其他人类MBT家族成员的选择性高50倍。UNC1215作用于L3MBTL3比作用于L3MBTL1选择性高约75倍。UNC1215浓度高达30μM时，对UHRF1的串联Tudor域, CBX7的染色质域，及JARID1A的PHD域没有作用活性。X-射线晶体学显示UNC1215 和L3MBTL3之间的一种独特的2:2多元互动模式。UNC1215作用于细胞是无毒的，通过MBT域的Kme结合口袋，直接结合到L3MBTL3。UNC1215增加GFP-L3MBTL3融合蛋白的细胞移动性和点突变，干扰GFP-L3MBTL3表型模拟的Kme结合功能，影响UNC1215的定位。UNC1215用来揭示一种新型的Kme依赖性的L3MBTL3与BCLAF1的互动，BCLAF1是一种与DNA损伤修复和细胞凋亡密切相关的蛋白质。[1]

激酶实验

AlphaScreen实验:

化合物实验板（1 μL，10 或 30 mM最高浓度）在1×实验缓冲液（20 mM Tris pH 8.0, 25 mM NaCl, 2 mM DTT 和 0.05% Tween-20）中稀释2步，使用Multimek自动移液器，1 μL加入到384孔实验Proxiplate孔中。通过Multidrop加入溶于1×实验缓冲液的9 μL蛋白质-肽混合物，在室温下温育30分钟。加入 2 μL链霉亲和素结合的供体和镍螯合物受体珠（45μg/mL，在1×实验缓冲液中），实验板在室温下黑暗中再温育30分钟。温育后，实验板在配备HTS alpha Screen激光的EnVision多标记微孔板检测仪上进行读数。实验中Screen高达10 或 30 μM，因此需标明这些钝性化合物仅仅在实验浓度范围内是无活性的。PHF23和JARID1A使用GST标记的，所以使用GST-受体珠。应当指出，所产生的L3MBTL4任何阳性结合曲线具有极低的斜率，这表明是非特异性相互作用。取在每种化合物浓度重复运行获得的数据点的平均值，绘制4-参数曲线拟合，计算IC50值。

细胞实验

Cell lines: HEK293T/17细胞

Concentrations: ~100 μM

Incubation Time: 24小时

Method: CellTiter-Glo发光细胞活力检测

(Only for Reference)

参考文献

[1] James LI, et al. Nat Chem Biol, 2013, 9(3), 184-191.