产品描述

Regorafenib (BAY 73-4506)是一个多靶点抑制剂，作用于VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3，PDGFR-β，Kit，RET和Raf-1，在无细胞试验中IC50分别是13 nM，4.2 nM，46 nM，22 nM，7 nM，1.5 nM和2.5 nM。

靶点（IC50 & Targe）

Kit,7 nM (cell free)

Raf-1,2.5 nM (cell free)

RET,1.5 nM (cell free)

VEGFR1,13 nM (cell free)

VEGFR2,4.2 nM (cell free)

B-Raf (V600E),19 nM (cell free)

体外研究

在 NIH-3T3细胞中 Regorafenib 强烈抑制 VEGFR2的 自磷酸化， IC50 为3 nM. 在HAoSMCs中, Regorafenib 抑制 PDGFR-β经过PDGF-BB刺激后的自磷酸化, IC50 为90 nM. 在MCF-7 乳腺癌细胞中， Regorafenib 也会抑制FGF10刺激后 FGFR 的信号传导. Regorafenib 非常有效的抑制KITK642E 和 RETC634W这两个突变的受体, IC50 分别是大约 20 nM 和 10 nM。 Regorafenib 抑制经过VEGF165 刺激后的 HUVECs细胞的增值, IC50 为 大约 3 nM. Regorafenib抑制 FGF2刺激后的 HUVECs和PDGF-BB刺激后的HAoSMCs细胞的增殖， IC50分别是127 nM 和 146 nM [1]。 Regorafenib通过抑制酪氨酸激酶受体(VEGFR, KIT, RET, FGFR和 PDGFR)和丝氨酸/ 苏氨酸激酶受体(RAF 和 p38MAPK)来靶向作用于肿瘤细胞增殖和肿瘤脉管系统[2]。Regorafenib以浓度依赖和时间依赖方式抑制 人Hep3B, PLC/PRF/5 和 HepG2 细胞的生长[3]。

体内研究

在多种临床前人类异种移植的小鼠模型上， Regorafenib有着很好的肿瘤生长抑制性，这种抑制具有剂量依赖特性, 表现为在乳腺 MDA-MB-231 和 肾脏 786-O 肿瘤模型中肿瘤减小. Regorafenib 不仅阻止了同源主要的 4T1乳腺肿瘤在脂肪垫中的原位生长，也抑制了肿瘤转移到肺部[1]。

激酶实验

激酶活性测定:

体外激酶实验用重组的VEGFR2 (鼠源， aa785–aa1367), VEGFR3 (鼠源 aa818–aa1363), PDGFR-β (aa561–aa1106), RAF-1 (aa305–aa648) 和 BRAFV600E (aa409–aa765)的激酶活性区域进行。初始的激酶抑制反应将Regorafenib的浓度固定为1 μM. IC50的值根据选定的相应的激酶来测定, 如VEGFR1 和 RET. TIE2 的激酶抑制效果采用均相时间分辨荧光分析法测定，利用重组的TIE2细胞内区域的GST融合蛋白和生物素化的-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG多肽作为底物。

细胞实验

Cell lines: GIST 882 和 TT 细胞

Concentrations: 5 nM-10 μM

Incubation Time: 96 小时

Method: 为了分析细胞增殖情况, 将GIST 882 和 TT 细胞培养在含有L-glutamine谷氨酸的RPMI 培养基中,MDA-MB-231, HepG2和A375 细胞培养在含有10% hiFBS 的 DMEM 培养基中。将细胞用胰酶消化, 按5× 104 个每孔接种在96孔板中并在含有10% FBS 的完全培养基中37°C培养过夜。第二天, 将对照和Regorafenib用培养基稀释成从10 μM 到5 nM的连续终浓度, 加入 0.2% DMSO,加入细胞培养基中并继续培养96小时。将细胞增殖情况进行量化。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 携带Colo-205, MDA-MB-231 细胞或者 786-O肿瘤的雌性无胸腺NCr nu/nu 小鼠

Formulation: 聚乙二醇400/125 mM 甲磺酸水溶液 (80/20) 或者聚丙烯 乙二醇/聚乙二醇400/Pluronic F68 (42.5/42.5/15 + 20% 水溶液)

Dosages: 3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

Administration: 口服

(Only for Reference)

参考文献

[1] Wilhelm SM, et al. Int J Cancer, 2011, 129(1), 245-255.

[2] Heng DY, et al. Ther Adv Med Oncol, 2010, 2(1), 39-49.

[3] Carr BI, et al. J Cell Physiol, 2013, 228(2), 292-297.