产品描述

Pemetrexed是一种新型抗叶酸和抗代谢药物，作用于TS，DHFR和GARFT，无细胞试验中Ki分别为1.3 nM，7.2 nM，和65 nM。

靶点（IC50 & Targe）

DHFR,7.2nM(Ki)

GARFT,65nM(Ki)

Thymidylate synthase,1.3nM(Ki)

体外研究

Pemetrexed有效抑制胸苷酸合酶(TS)，Ki为1.3 nM, 也显著抑制其他关键叶酸酶, 包括二氢叶酸还原酶(DHFR)和甘氨酰胺核苷酸转甲酰酶(GARFT) ， Ki分别为7.2 nM和 65 nM。Pemetrexed作用于CCRF-CEM白血病, GC3/C1结肠癌, 和HCT-8 回盲肠癌细胞，具有抗增殖活性,IC50分别为25 nM, 34 nM 和220 nM。而且, 胸甘和次黄嘌呤联用作用于以上三种细胞系，完全可逆转LY231514引起的细胞毒性。[1] 最新研究显示Cisplatin和Pemetrexed联用作用于感染腺病毒表达SOCS-1载体的MPM细胞，通过抑制细胞增殖，侵入, 和 诱导凋亡而具有抗癌效果。[2]

体内研究

Pemetrexed 作用于人类H460非小细胞肺癌移植瘤，推迟肿瘤生长。而且, Pemetrexed 和紫杉醇联用，更大程度推迟H460肿瘤生长，且和Vinorelbine及 Carboplatin产生添加反应。[3]

激酶实验

酶活实验:使用分光光度分析法检测340 nm处由于形成7,8-二氢叶酸产物而导致提高的吸光值，而测定胸苷酸合酶（TS）活性。实验buffer含50 mM N-三（羟甲基）甲基-2-氨基乙烷磺酸, 25 mM MgC12, 6.5 mM 甲醛, 1 mM EDTA, and 75 mM 2-巯基乙醇，pH 7.4。脱氧尿苷一磷酸, 6R-MTHF, 和 hIS 的浓度分别为100 μM, 30μM和 30 nM (1.7 毫单位/mL)。在 6R-MTHF 浓度时,在未受抑制反应中加入6种浓度的抑制剂进行反应。通过回归曲线分析，使用ENZFITTER程序应用用Morrison 等式获得Ki。通过分光光度计法检测在340 nm处底物NADPH 和 7,8-二氢叶酸的消失，而测定DHFR活性。反应在0.5 mL 50 mM磷酸钾buffer 中25oC下进行，磷酸钾buffer含150 mM KC1 和10 nM 2-巯基乙醇,pH 7.5,和14 nM (0.34 毫单位/mL) DHFR。NADPH浓度为 10 μM，7,8-dihydrofolate浓度为5, 10,或 15 μM。 在每种7,8-dihydrofolate浓度时 ，在未受抑制反应中加入7种浓度的抑制剂进行反应。通过回归曲线分析，用ENZFITI'ER微机程序，应用Morrison等式获得Ki值。使用分光光度分析法检测295 nm处由于形成5,8-二氢叶酸产物而导致提高的吸光值，而测定GARFT活性。反应溶剂含 75 mM HEPES,20% 甘油, 和 50 mM α-硫代甘油 , pH 7.5。使用的底物和酶是10 μM α,β-甘氨酰胺核糖核苷酸, 0-10 μM 10-甲基-5,8二氢叶酸, 及10 nM (1.9毫单位/mL) GARFT。使用Beckman DU640 分光光度计的酶应用程序， 通过回归曲线分析，应用Michaelis-Menten等式计算 Ki 值。

细胞实验

Cell lines: CCRF-CEM白血病,GC3/C1 结肠癌,HCT-8回盲肠癌细胞

Concentrations: 0到30 μM

Incubation Time: 72小时

Method: 绘制剂量反应曲线测定IC50。Pemetrexed 溶于DMSO，浓度为4 mg/mL，然后用细胞培养基稀释到所需指定的浓度。培养在完全培养基中的CCRF-CEM白血病细胞加到24孔板上，总体积为2.0 mL。平行孔中加入不同浓度Pemetrexed，DMSO终体积为0.5%。然后在37oC下温育72小时。温育末期，使用ZBI Coulter 计数器测细胞数。在300 μM AICA, 5 μM 胸甘, 100 μM 次黄嘌呤,或5 μM 胸甘和100 μM次黄嘌呤同时存在时，测定每种化合物的 IC50值。为了测粘附的肿瘤细胞,使用修正的初始MTT 比色分析法测定细胞毒性。人类肿瘤细胞接种在96孔平底组织培养板中，每孔含100 μL实验培养基。实验培养基为含10% FCS 的无叶酸RPMI 1640培养基，2 nM 叶酸或2.3 μM叶酸作为唯一叶酸来源。孔1A 作为空白对照。抗叶酸储存液在Dulbecco's PBS中制备，浓度为1 mg/mL, 然后在PBS中连续稀释2倍。在三个重复孔中加入10 μL每种浓度的样品。然后在37oC下温育72小时。MTT溶于PBS，浓度为5 mg/mL,10 μL 储存MTF 溶液加到每孔中,然后在 37oC下再温育2小时。然后每孔中加入100 μL DMSO。然后通过MTT甲增溶,在 Dynatech MR600读数器上进行读数，检测波长为570 nm，参考波长为630 nm。测定IC50值。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 皮下注射EMT-6乳腺癌,人类HCT116结肠癌,和人类H460非小细胞肺癌的小鼠

Formulation: Pemetrexed溶于DMSO，然后用水稀释。

Dosages: 100 mg/kg或150 mg/kg

Administration: 腹腔注射

(Only for Reference)

参考文献

[1] Shih C, et al. Cancer Res. 1997, 57(6), 1116-1123.

[2] Iwahori K, et al. Int J Cancer. 2012, doi: 10.1002/ijc.27611.

[3] Teicher BA, et al. Clin Cancer Res. 2000, 6(3), 1016-1023.