产品描述

Bisindolylmaleimide I (GF109203X)是一种有效的PKC抑制剂，作用于PKCα，PKCβI，PKCβII和PKCγ，无细胞试验中IC50分别为20 nM， 17 nM， 16nM和20 nM，作用于PKC比作用于EGFR，PDGFR和胰岛素受体选择性高3000倍以上。

靶点（IC50 & Targe）

PDGFR,65μM

PKCα,20nM

PKCβ1,17nM

PKCβ2,16nM

PKCγ,20nM

体外研究

GF109203X，作为ATP竞争性PKC抑制剂，抑制激活蛋白激酶C诱导的血小板聚集，可以作为研究PKC在信号转导途径作用的潜在工具。[1] GF109203X产生了对P-糖蛋白和MRP介导的多药耐药的逆转活性。[2][3] GF109203X通过抑制PKC，显著降低了卡巴胆碱刺激的ERK1/2的活化和SNU-407结肠癌细胞随后的扩散。[4]

体内研究

GF109203X (10 μg/mouse, i.pl.)剂量依赖性抑制Wistar大鼠体内BK诱导的机械痛觉过敏。[5]

激酶实验

蛋白激酶C检测:

蛋白激酶C是通过测量32PI从gamma-32PI ATP转移到富含赖氨酸的组蛋白型III-S进行的。将反应混合物（80 μL）含有50 mM Tris-HCl, pH 7.4，100 μM 氯化钙，10 mM 氯化镁，37.5 μL/ mL的组蛋白型III，10 μM gamma-32PI ATP（1250 cpm/皮摩尔），31 μM牛脑磷脂酰丝氨酸和0.5μM 1,2 sn-dioleylglycerol。十五微升纯化的PKC（终浓度为0.38 μg/mL）加入到培养混合物。在30℃下10分钟后，通过加入30μL 30毫克/毫升的酪蛋白和0.9毫升12％的三氯乙酸停止。该酸性沉淀通过离心收集，溶于1N 氢氧化钠（100 μL），并用1ml的12％三氯乙酸再次沉淀。将沉淀物溶解在1N氢氧化钠（100微升），32P掺入由水溶胶闪烁计数测量。

细胞实验

Cell lines: SNU-407结肠癌细胞

Concentrations: 1 μM

Incubation Time: 48 小时

Method:细胞增殖是通过3-（4,5 -二甲基吡啶-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）测定的。细胞接种在96孔板中，并让其生长过夜。细胞血清饥饿18-24小时，然后用1mM的乙酰胆碱在100 μL的无血清RPMI 1640培养液处理48小时。在加入卡巴胆碱30分钟前加入抑制剂。10微升MTT溶液（5毫克/毫升）加到各孔中，并将板在37℃温育3小时。除去培养基后，所形成的甲臜晶体的溶解在100 μL的DMSO中。在570 nm处的吸光度用酶标仪测定，背景吸光度在690nm处被减去。各测定法一式三份进行。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: Wistar rats

Formulation: 10% DMSO in saline

Dosages: 10 μg

Administration: i.pl

(Only for Reference)

参考文献

[1] Toullec D, et al. J Biol Chem. 1991, 266(24), 15771-15781.

[2] Gekeler V, et al. Br J Cancer. 1996, 74(6), 897-905.

[3] Gekeler V, et al. Biochem Biophys Res Commun. 1995, 206(1), 119-126.

[4] Park YS, et al. Mol Cell Biochem. 2012, 370(1-2), 191-198.

[5] Souza AL, et al. Br J Pharmacol. 2002, 135(1), 239-247.