应用

ANNA是一个理想的比率型pH敏感探针，它的吸收和发射光谱在生理pH范围内（pH 6-8）随pH的改变发生可逆的变化（如图1），并且在酸性和碱性状态下都有很高的荧光量子产率，其pH响应不受偶联基团或材料影响（如图2）[1-2]。ANNA应用广泛，已成功用于固定细胞在不同pH环境中成像（如图3）；活细胞内pH和肿瘤微环境体内外pH的监测。

特点和优势：

• 在生理pH范围内具有良好的响应；
• 高光稳定性和高荧光量子产率；
• 离子强度对荧光团不产生干扰, 可用于活细胞、组织和动物等复杂生物体系；
• 可方便地通过活性酯法偶联其他基团，且pH响应功能不受影响。

产品使用说明

• 细胞置于直径为20mm的玻璃基底细胞培养皿（MatTek Co.）中培养24h；
• pH探针ANNA（4 M）与细胞在细胞培养基中孵育1-2h；
• 用PBS缓冲液（pH=7.4）清洗细胞3次，去除游离的探针；
• 细胞成像：用100倍共聚焦显微镜观察。激发波长是405nm和488nm，荧光信号收集1通道425-475 nm和2通道500-600 nm的荧光强度^[注1];
• 制作pH标准曲线：用1mL含5 ug/mL nigericin^[注2]的不同pH的高钾离子HEPES缓冲液^[注3]处理细胞10min；进行细胞成像，根据I2通道/I1通道与pH的关系绘制曲线；
• 将待测样品比值带入标准曲线，获得实际细胞内外的pH。

注：
1：如配有455nm激光器：可直接用455nm激发，收集1通道（470nm-500nm）和2通道（505nm-540nm）荧光强度。
2：一种运载钾离子和氢离子的载体，能够使细胞内外的pH快速地达到一致。
3：高钾离子HEPES缓冲液含有125 mM KCl, 20 mM NaCl, 0.5 mM CaCl₂, 0.5 mM MgCl₂, 5 mM 葡萄糖和20 mM HEPES。

参考文献

1. Xiangjun Liu, Linlin Wang, Tao Bing, Nan Zhang, Dihua Shangguan. ACS Appl. Bio Mater., 2019, 2, 1368–1375.
2. Yi Hou, Jin Zhou, Zhenyu Gao, Xiaoyu Sun, Chunyan Liu, Dihua Shangguan, Wensheng Yang, Mingyuan Gao. ACS nano, 9, 3199-3205 (2015).

其他说明

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