产品描述

D 4476 是一种有效的，选择性的，细胞渗透性 CK1 (casein kinase 1) 抑制剂，无细胞测定中对来自粟酒裂殖酵母的 CK1 和 CK1δ，IC50 分别为 200 nM 和 300 nM 。也是一种 ALK5 抑制剂，IC50 为 500 nM。

靶点（IC50 & Targe）

ALK5,500nM

CK1,200nM

CK1δ,300nM

体外研究

D4476 (10 μM)有效抑制CK1和ALK5，相对于对照组的活性分别为7%和22%。在H4IIE肝癌细胞中，D4476特异性抑制Ser322和Ser325上内源性叉头框转录因子O1a (FOXO1a)的磷酸化，而不影响其他位点的磷酸化。[1] D4476在ANBL6，INA6和RPMI8226细胞系中诱导细胞毒性，MM1S 和 U266细胞系对于其敏感度较低，而OPM1细胞系完全耐药。高浓度的(50 μM) D4476在所有多发性骨髓瘤(MM)细胞系中诱导毒性。在MM细胞中，D4476增加TP53，P27，和FADD的蛋白质水平，以及细胞周期进程，并诱导细胞凋亡。[2] D4476对白血病干细胞(LSCs)的治疗相对于正常LSCs表现出高度选择性杀伤。[3]

Cell Data

激酶实验

CK1激酶试验:所有蛋白激酶试验(25 μL)在室温(21℃)下进行。试验使用Biomek 2000实验室自动化工作站以96孔格式进行40分钟。试验中醋酸镁和γ-33PATP (800 cpm/pmol)的浓度分别为10 mM和0.1 mM。试验用MgATP起始，通过加入5 μL 0.5 M磷酸停止。随后将等份试样点样到P30过滤棉，在75 mM磷酸中洗涤4次，在甲醇中洗涤1次以除去ATP，然后干燥，并计数放射性。CK1 δ (5-20 m-units)，在20 mM Hepes，pH 7.5，0.15 M NaCl，0.1 mM EGTA，0.1% (v/v) Triton X-100，5 mM 二硫苏糖醇，50% (v/v) 甘油中稀释，在包含20 mM Hepes，pH 7.5，0.15 M NaCl，0.1 mM EDTA， 5 mM DTT，0.1% (v/v) Triton X-100和0.5 mM底物肽的培育液中测定其对多肽RRKDLHDDEEDEAMSITA的作用。

细胞实验

Cell lines: MM细胞系，包括MM1S，RPMI8226，U266，MM1R，OPM1，OPM2，INA6，ANBL6，ANBL-6VR，LR5和 RPMI-DOX40 (DOX40)细胞

Concentrations: 50 μM

Incubation Time: 72小时

Method: MM细胞以一式三份接种到96孔板的100 μL培养基中。D4476在另外100 μL培养基中以0，5，10，20，30，40，和50 μM的浓度加入到每孔中。细胞活性在72小时药物暴露后通过MTT测定。吸光度在570 nm下用分光光度计测量。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Rena G, et al. EMBO Rep. 2004, 5(1), 60-65.

[2] Hu Y, et al. Leukemia. 2015, 29(2), 474-482.

[3] J?r?s M, et al. J Exp Med. 2014,211(4), 605-612.

[4] Bain J, et al. Biochem J. 2003, 371(Pt 1), 199-204.