产品描述

UNC1999一种有效的具有口服活性的EZH2和EZH1选择性抑制剂，无细胞试验中IC50分别为2 nM和45 nM，对广泛表观遗传学相关或不相关的靶点选择性大于1000倍。

靶点（IC50 & Targe）

EZH1,45nM

EZH2,2nM

体外研究

UNC1999在体外对EZH2 Y641和EZH2 Y641F突变体有很强的抑制活性。UNC1999浓度依赖性的减少了MCF10A细胞系中H3K27me3的水平，其IC50为124 nM，产生了较低的细胞毒性。在含有EZH2Y641N突变的DLBCL细胞系中UNC1999显示出对细胞增殖有效的浓度依赖性的抑制。另外，生物素化的UNC1999可以从HEK293T细胞裂解液中分离EZH2，因此能够被用在化学蛋白组学研究。

体内研究

UNC1999 (150 and 50 mg/kg, i.p.)体内处理使其在24小时以上的时间内保持在血浆中的浓度高于其细胞IC50值。另外，UNC1999对小鼠有口服活性，从而可以更实用和方便的用于慢性动物实验。

激酶实验

临近闪烁分析法:

以氚代腺苷甲硫氨酸接合生物素标记的多肽作为底物，采用闪烁迫近分析法检测甲基转移酶活力。反应缓冲液系统： 50 mM Tris pH 9.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100（for SMYD2 and SMYD3 ）; 25 mM 磷酸钾 pH 8.0, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2 and 0.01% Triton X-100 （for G9a, GLP and SUV39H2）; 20 mM Tris pH 8.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100 （for other HMTs）。加入10 μL of 7.5 M 盐酸胍淬灭酶反应后加入缓冲液，转移至384孔板，孵育并计数。无化合物的度数记为100%，无酶时计数记为0%。100 nM-100 μM的化合物被用于检测IC50.

细胞实验

Cell lines: 含有EZH2Y641N突变体的DLBCL细胞系

Concentrations: ~5 μM

Incubation Time: 8天

Method:DB细胞系,一种具有高度扩散性的包含EZH2 Y641N突变的B细胞淋巴瘤细胞系，从ATCC中获得并在添加了10%胎牛血清、抗生素和各种浓度的化合物(DMSO control, UNC1999, or UNC2400)的RPMI 1640培养。含有被测抑制剂或者空白对照的培养基，每三天更换一次。使用TC20自动细胞计数系统测量活细胞数目至少需要三次独立实验。总组蛋白按照酸性萃取步骤从细胞核中取出。大约1 μg总族蛋白用15% SDS-PAGE分离，转移到PVDF细胞膜，组蛋白抗体探测。被用于这个实验的抗体是针对EZH2, general H3, and H3K27me3。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 雄性瑞士白化小鼠

Formulation: DMSO

Dosages: ~150 mg/kg (i.p.), ~50 mg/kg (口服)

Administration: 腹腔注射或口服

(Only for Reference)

参考文献

[1] Konze KD, et al. ACS Chem. Biol. 2013, 8 (6), 1324–1334.

[2] Structural Genomics Consortium.