产品描述

Ulixertinib (BVD-523, VRT752271)是有效的可逆ERK1/ERK2抑制剂，其抑制ERK2的IC50<0.3 nM 。Phase 1。

靶点（IC50 & Targe）

ERK2,<0.3nM

体外研究

在一个包含b-RAFV600E突变体的A375黑色素瘤细胞中，Ulixertinib降低磷酸化的ERK2 (pERK)水平和下游激酶RSK (pRSK)的磷酸化水平，IC50分别为4.1/0.14 μM。Ulixertinib也会抑制A375细胞增殖，IC50为180 nM。[1]

激酶实验

ERK2催化抑制的Rapidfire质谱分析试验:

MEK U911活化的ERK2蛋白在组织内部表达并纯化。酶和底物溶液在包含50 mM Tris (pH 7.5)，10 mM MgCl2，0.1 mM EGTA，10 mM DTT 和 0.01% (v/v) CHAPS的试验缓冲液中制备。1.2 nM ERK2蛋白质在试验缓冲液中制备，将10μL加入包含测试和对照品化合物的聚丙烯384孔板的每个孔中。化合物板预先加入范围为100μM 到0.1 nM 的12个不同剂量，以计算化合物IC50s，与1%试验化合物中总DMSO浓度。酶和化合物在室温下预培养20分钟后，10μL 底物溶液加入16μM Erktide (IPTTPITTTYFFFK)和120μM ATP (测量Km) 组成的试验缓冲液中。反应在室温下进行20分钟，然后加入80μL 1% (v/v)甲酸淬灭反应。然后试验板在RapidFire质谱分析平台上运行以测量底物(未磷酸化的Erktide)和产物(磷酸化的Erktide)。

细胞实验

Cell lines: A375 细胞

Concentrations: ~30 μM

Incubation Time: 72小时

Method: A375细胞在DMEM，10% (v/v)胎牛血清和1% (v/v) L-谷氨酰胺组成的细胞培养基中培养。采集后，将细胞分别加入黑色384孔Costar板，在40μL总体积的细胞培养基中使每孔含有200个细胞，然后在37℃，90%相对湿度和5% CO2旋转式培养基中培养过夜。使用Labcyte Echo 555声控分配器将测试化合物和对照品直接给药至细胞板内部308孔。细胞在30 μM到0.03 nM范围内以12个不同浓度给药，计算化合物IC50s，与0.3%试验化合物中总DMSO浓度。然后细胞板在37℃下培养72小时。将细胞中加入20 μL 含12%甲醛的PBS/A (4%终浓度) 和1:2000稀释的Hoechst 33342固定并着色，在室温下培育30分钟，然后用PBS/A洗涤。使用Cellomics ArrayScanTM VTI成像平台在着色的细胞平板上计数细胞。在第0天，细胞板依然固定，着色，并读取数据生成细胞计数基线，以测定化合物细胞毒性以及抗增殖作用。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Ward RA, et al. J Med Chem. 2015, 58(11), 4790-4801.