产品描述

AG-490 (Tyrphostin B42)是一种EGFR抑制剂，在无细胞试验中IC50为0.1 μM，作用于EGFR比作用于ErbB2选择性高135倍，对JAK2也有抑制作用，对Lck，Lyn，Btk，Syk和Src没有抑制活性。

靶点（IC50 & Targe）

EGFR,0.1μM

HER2/ErbB2,13.5μM

JAK2,~10μM

体外研究

AG-490抑制EGF依赖的HER 14细胞增殖，IC50为3.5 μM。[1] 与特异性作用于前B细胞急性白血病（ALL）细胞抑制组成型激活的JAK2 相一致，5 μM AG-490通过诱导程序性细胞死亡，几乎完全抑制所有ALL 细胞生长，而对正常造血功能不会造成有害影响。AG-490不会抑制Lck, Lyn, Btk, Syk, 和 Src激活。[2]AG-490 (60-100 μM) 抑制Stat3sm组成型激活，且抑制自发的或白细胞介素2诱导的蕈菌(MF)肿瘤细胞生长 ，IC50分别为75 μM和 20 μM。[3]通过抑制JAK3和 STAT5a/b.的活性，AG-490有效抑制IL-2调节的人 T 细胞生长， IC50 为 25 μM。[4] 虽然5 μM AG-490 单独给药处理对FDrv210H细胞增殖没有效果，但是AG-490可以协同 STI571而增强 STI571抑制p210bcr-abl促进增殖的效果。[5]AG-490 作用于MOPC, MPC11, 和S194细胞 ,显著抑制Stat3 组成型激活，导致显著的细胞凋亡，这种作用存在剂量依赖性。[6] AG-490 (100 μM) 抑制Akt磷酸化, 抑制核因子-κB激活, 且激活GSK-3β,导致c-Myc降低。AG-490 (50 μM)可以诱导表达Bcr-Abl 突变型T315I 和E255K 的抗Imatinib的BaF3细胞凋亡。[7] 30 μM AG-490 不仅抑制Epo诱导的野生型JAK2磷酸化，也抑制 组成型的JAK2 V617F突变型磷酸化。AG-490作用于BaF3细胞，有效抑制JAK 2 V617F 突变诱导的细胞因子非依赖的细胞生长。[8]

体内研究

研究 AG-490处理，大幅降低 CD45+和HLA-DR+ 细胞数，作用于骨髓时，这两种细胞数分别从48% 和46%降低到不可检测水平，作用于未处理小鼠脾脏时，这两种细胞数分别从 38%和 22% 降低到不可检测水平。[2] 在体内，AG-490 处理，引起小鼠骨髓瘤细胞凋亡，但是不抑制IL-12诱导的巨噬细胞活化和IFN-γ产量。[6]与在体外抑制 JAK2 V617F 突变活性一致，AG-490每天按0.5 mg处理裸鼠 10天，高效抑制JAK2 V617F突变诱导的肿瘤形成和肿瘤细胞入侵。[8]

激酶实验

体外激酶自磷酸化检测:

AG-490溶于DMSO 10%-H2O-乙醇 45%。原油膜提取物 (0.125 μg/mL)与EGF (20 nM) 在50 mM HEPES buffer, pH 7.6, 和125 mM NaCl中在 4oC下预温育15分钟。在V形 96孔板上进行 EGFR 或 ErbB2激酶自磷酸化活性检测，在4oC 进行30分钟。在含反应混合物(12 μL, 50mM, HEPES, pH 7.4,125 mM NaCl, 12 mM M8Ac2, 2 mM MnCl2, 1 mM NaVO3, 1 μM ATP, 及1 μCiγ-32PATP,) 及浓度不断增高的AG-490 (4 μL)的每孔中加入膜抽提物(8 μL)。加入热样本缓冲液终止反应，样本在6% SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳微小胶体上跑胶，然后烘干凝胶，在线性处理时间进行自显影。扫描受体带，然后通过Ez-Fit 程序分析结果。 为了分析 JAK2, JAK2的自磷酸化，使用从G2期细胞得到的裂解物抗JAK2抗体，进行免疫沉淀，与浓度不断增高的AG-490(0-50 μM)预处理16小时。免疫复合物与抗磷酸抗体进行免疫印迹。通过测量JAK2自磷酸化而测定对体外激酶活性的抑制情况。

细胞实验

Cell lines: Pre-B ALL

Concentrations: 溶于DMSO, 终浓度为~ 50 μM

Incubation Time: 16小时

Method: 使用不同浓度AG-490 处理细胞16小时。为了测定细胞增殖，加入[3H]胸甘(1 μCi) 培养，6小时或更长时间以后终止培养。收集细胞，样本在液体闪烁计数器上计数。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 静脉注射ALL 细胞的SCID小鼠

Formulation: 溶于DMSO

Dosages: 每天0.85 mg + 0.5 mg

Administration: 持续输液泵输液加之以每天腹腔注射

(Only for Reference)

参考文献

[1] Gazit A, et al. J Med Chem, 1991, 34(6), 1896-1907.

[2] Meydan N, et al. Nature, 1996, 379(6566), 645-648.

[3] Nielsen M, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 1997, 94(13), 6764-6769.

[4] Kirken RA, et al. J Leukoc Biol, 1999, 65(6), 891-899.

[5] Sun X, et al. Blood, 2001, 97(7), 2008-2015.

[6] Burdelya L, et al. Mol Cancer Ther, 2002, 1(11), 893-899.

[7] Samanta AK, et al. Cancer Res, 2006, 66(13), 6468-6472.

[8] Abe M, et al. Int Immunopharmacol, 2009, 9(7-8), 870-877.