产品描述

EI1是一种有效的选择性EZH2抑制剂，对EZH2 (WT)和EZH2 (Y641F)的IC50分别为15 nM和13 nM。

靶点（IC50 & Targe）

Ezh2 (wild-type),15nM

EZH2 (Y641F),13nM

体外研究

在DLBCL细胞中，EI1抑制细胞内H3K27甲基化，并激活Ezh2靶基因p16表达。在小鼠胚胎成纤维细胞中，EI1也会抑制H3K27me3和细胞增殖。此外，EI1选择性抑制携带Ezh2突变的DLBCL细胞生长，并引起细胞周期阻滞和细胞凋亡。[1]

激酶实验

生化检测:

对于IC 50测定，EI1在DMSO中三倍连续稀释为12种不同浓度，起始浓度为1 μM。反应在室温下培养120分钟，通过加入淬灭溶液(2.5% TFA 与320 nM d4-SAH)停止培养。SAH的产生使用API 4000三重四极杆液质联用，Turbulon Spray与超快速液相色谱仪结合定量。抑制百分比使用阳性(不含抑制剂)和阴性 (不含酶)归一化，IC50使用PRISM计算。S-腺苷蛋氨酸(SAM)竞争的酶学研究通过略微改变的反应条件进行：10 μM EI1用作连续稀释的起始剂量。SAM在1 μM 到50 μM (对应 1 × Km 到 50 × Km)范围内被滴定，底物肽以饱和状态(10 μM)存在于终反应混合液。对于Table 1中的组蛋白甲基转移酶(HMT)性能，所有HMTs从大肠杆菌或杆状病毒系统中纯化为重组蛋白。G9a，SuV39H2，Set7/9，CARM1，SETD8，NSD3，SETD2，和Dot1L，以及全长 SmyD2蛋白的催化域用于生化检测。HMT生化反应以酶学研究和SAM以及底物Km测定精确定义。SAM和底物浓度对大多数HMTs保持为各自的Km，除了那些(SmyD2 和 Set7/9)低SAM-Km的HMTs，使用0.5 μM SAM。所有HMT反应使用相同的测试形式进行，生化反应中产生的SAH通过LC-MS定量。

细胞实验

Cell lines: Ezh2 突变型 DLBCL 细胞(WSU-DLCL2，SU-DHL6，Karpas422，DB，和 SU-DHL4)，Ezh2 野生型 DLBCL 细胞(OCI-LY19 和 GA10)，以及小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)

Concentrations: ~10 μM

Incubation Time: 11-15 天

Method: 以指数方式生长扩散的大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞以1 × 105细胞/毫升的密度，与指示浓度的EI1接种于12孔板。活细胞数每3-4天通过Vi-CELL测定，进行14或15天。小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)以2.5 × 104细胞/毫升的密度接种于6孔板，并用EI1 (3.3 μM) 或 4-OH-tamoxifen (100 nM)处理。活细胞数在第3，6和11天测定。在细胞计数时，重新装满新鲜培养基和化合物，细胞划分为1 × 105细胞/毫升的密度。IC50使用PRISM计算，所有增殖实验重复两次以上，给出代表性数据。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Qi W, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012, 109(52), 21360-