产品描述

CPI-169是一种有效的选择性EZH2抑制剂，作用于EZH2 WT，EZH2 Y641N，和EZH1的IC50分别为0.24 nM，0.51 nM，和6.1 nM。

靶点（IC50 & Targe）

EZH1,6.1nM

EZH2 WT,0.24nM

EZH2 Y641N,0.51nM

体外研究

在KARPAS-422细胞中，CPI-169对细胞活性表现出剂量依赖性抑制作用，与ABT-199联合使用时产生协调的抗增殖活性。对25个NHL细胞系的其中16个，CPI-169也会抑制细胞生长，GI50 <5 μM。[1]

体内研究

在负荷KARPAS-422异种移植物的小鼠中，CPI-169 (200 mg/kg, s.c.)有效抑制H3K27me3水平，并导致淋巴肿瘤退化，而不影响体重或引起任何明显的副作用。[1]

激酶实验

生物化学试验:

化合物效力通过3H-SAM整合到生物素化H3多肽进行评估。具体而言，包含EZH1 (160 pM)，wt EZH2 (40 pM)，或Y641N突变体EZH2 (80 pM，EZH2在内部制备)的PRC2与H-SAM (0.9 μM)，2μM H3K27me3 激活的多肽 (H2N-RKQLATKAAR(Kme3)SAPATGGVKKP-酰胺)和化合物(以10点双倍剂量反应滴定)在50 mM Tris (pH 8.5)，1 mM DTT，0.07 mM Brij-35，0.1% BSA，和0.8% DMSO组成的12.5 μL总体积缓冲液中，黑色384孔板上预培养120分钟。生物素化的H3底物肽(H3K27me1用于wt EZH2，H3K27me2用于Y641N突变型EZH2；H2N-RKQLATKAAR(Kmen)SAPATGGVKKP-NTPEGBiot) 以2 μM储备液在12.5 μl中起始反应，并在室温下反应5小时。通过加入20 μL STOP溶液(50 mM Tris (pH 8.5)，200 mM EDTA, 2 mM SAH)淬灭反应。35 μL淬灭的溶液转移到链霉亲和素Flashplates，培育过夜，洗涤，并在TopCount阅读器上读取。用于滴定的所有化合物稀释液溶于DMSO中，终DMSO浓度为0.8% (v/v)，转化维持在< 5%。IC50s使用非线性最小二乘法四参数拟合方程计算。

细胞实验

Cell lines: 25 NHL 细胞系

Concentrations: ~10 μM

Incubation Time: 4天

Method: 相对细胞数量通过通过CellTiter-Glo (CTG)发光细胞活性试验使用Envision仪器进行评估。GraphPad Prism 6.0用于曲线拟合，以及IC50/GI50和Hill系数(H)计算。GI90使用公式：EC90 = (90 /100-90)1/H * EC50计算。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 负荷KARPAS-422皮下异种移植物的小鼠

Formulation: 10% DMSO + 60% polytheylene glycol 400 + 30% ddH2O

Dosages: 200 mg/kg, BID

Administration: s.c.

(Only for Reference)

参考文献

[1] Bradley WD, et al. Chem Biol. 2014, 21(11), 1463-1475.