产品描述

Tubastatin A是一种有效的，选择性HDAC6抑制剂，无细胞试验中IC50为15 nM，选择性远高于所有其他同工酶(1000倍)除了HDAC8(57倍)。

靶点（IC50 & Targe）

HDAC6,15nM

体外研究

Tubastatin A选择性作用于所有同工酶除了HDAC8，对所有亚型不含HDAC8，保持超过1000倍的选择性，对HDAC8具有约57倍的选择性。2.5 μM Tubastatin A优先诱导α-tubulin 高度乙酰化。10 μM Tubastatin A轻微诱导组蛋白乙酰化。Tubastatin A 5 μM开始对同型半胱氨酸诱导的神经元细胞死亡具有保护作用，这种作用具有剂量依赖性，10 μM时，达到完全保护。[1]Tubastatin A (10 μM) 作用于胆管癌细胞系，诱导乙酰化的α-tubulin水平增加，和初级纤毛表达的恢复，初级纤毛表达的恢复与下调Hedgehog (Hh)和MAPK信号通路，以及减少细胞增殖率（平均50％）和浸润（40％）相关。[2]Tubastatin A作用于LPS刺激的人类 THP-1巨噬细胞，显著抑制TNF-α和IL-6，IC50分别为272 nM 和 712 nM。Tubastatin A作用于小鼠Raw 264.7巨噬细胞，抑制一氧化氮（NO）分泌，这种作用具有剂量依赖性，IC50为4.2 μM。[3]

体内研究

Tubastatin A降低体内胆管癌的生长。Tubastatin A(10 mg/kg)处理同基因大鼠原位胆管癌模型，诱导低于平均瘤重6倍，降低肿瘤重量与肝脏重量和体重（分别为5和5.6倍）的比值。Tubastatin A 处理肿瘤，与对照组相比，显著降低PCNA阳性细胞的量(34% vs 65%)。[2]Tubastat A按30 mg/kg剂量腹腔注射给药弗氏完全佐剂（FCA）诱导的动物炎症模型，显著抑制鼠爪体积。Tubastat A(30 mg/kg 腹腔注射)处理胶原诱导型关节炎DBA1小鼠的爪子组织，显著降低临床评分（〜70％），和IL-6表达。[3]

激酶实验

HDAC酶试验:

Tubastatin A在实验 Buffer(50 mM HEPES, pH 7.4, 100 mM KCl, 0.001% Tween-20, 0.05% BSA，和 20 μM tris(2-carboxyethyl)phosphine) 中溶解和稀释到终浓度的6倍。HDAC酶在实验 Buffer 中稀释到终浓度的1.5倍，与Tubastatin A预温育10分钟，然后加入底物。 通过滴定曲线测得，用于每种酶的FTS(HDAC1, HDAC2, HDAC3, 和HDAC6) 或 MAZ-1675 (HDAC4, HDAC5, HDAC7, HDAC8, 和 HDAC9)量等于米氏常数(Km)。使用0.3 μM测序级胰蛋白酶将FTS或MAZ-1675在实验 Buffer中稀释到终浓度的6倍。底物/胰蛋白酶混合物加入到酶/化合物混合物中，震荡实验板60秒，然后置于SpectraMax M5酶标仪上。赖氨酸侧链在肽底物中脱乙酰化后，监测酶促反应的7-amino-4-methoxy-coumarin释放，监测30分钟，计算反应的线性速率。

细胞实验

Cell lines: 人体胆管癌细胞系HuCCT-1

Concentrations: ~10 μM

Incubation Time: 21 天

Method:细胞生长在软琼脂中，测评锚定非依赖性生长。约25,000个细胞悬浮在培养基的0.4％琼脂中，超过1％琼脂层在6孔板中。每周加入两次培养基，温育21天，拍摄图片。使用Gel-Pro软件分析菌落的数量和尺寸。

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动物实验

Animal Models: 携带胆管癌移植瘤BDEneu的大鼠

Formulation: --

Dosages: 10 mg/kg

Administration: 每天腹腔注射

(Only for Reference)

参考文献

[1] Butler KV, et al. J Am Chem Soc, 2010, 132(31), 10842-10846.

[2] Gradilone SA, et al. Cancer Res, 2013, 73(7), 2259-2270.

[3] Vishwakarma S, et al. Int Immunopharmacol, 2013, 16(1), 72-78.

[4] Santo L, et al. Blood, 2012, 119(11), 2579-2589.