产品描述

SGI-1027是一种DNMT抑制剂，作用于DNMT1，DNMT3A和DNMT3B，无细胞试验中IC50分别为6，8和7.5 μM。

靶点（IC50 & Targe）

DNMT1,6μM

DNMT3A,8μM

DNMT3B,7.5μM

体外研究

SGI-1027通过直接抑制DNMTs而抑制DNA甲基化，并导致DNMT1在各种人癌细胞系中选择性降解。SGI-1027在大鼠肝癌H4IIE细胞中表现出很小或没有毒性作用。[1] SGI-1027 (0-100 μM)在U937人白血病细胞系中表现出适度的促凋亡作用，而在细胞周期中没有相关变化。[2]

激酶实验

DNA 甲基转移酶(CpG 甲基转移酶) 试验:

DNA甲基化酶的活性通过使用修改过的DE-81离子交换过滤器试验，测量Ado-Met的3H1甲基组与DNA的整合而测定。重组人DNMT1，重组小鼠Dnmt3a/ Dnmt3b (500 纳克)与500纳克poly(dI-dC)或半甲基化DNA双链和75或150 nM (0.275μCi 或 0.55μCi)的甲基-3H- 腺苷甲硫氨酸(Ado-Met)，总体积为50微升，在37℃下培育1小时。M. Sss I在供体缓冲液中进行测试。加入指示浓度的SGI-1027或decitabine。每个反应重复两份进行，包括不含抑制剂或DNA的对照组。在Whatman DE-81离子交换过滤盘上浸透反应混合物停止反应，清洗(5次，每次10分钟，用0.5M 磷酸钠缓冲液；pH 7.0)干燥，并在闪烁计数器上计数。从包含DNA的反应混合物得到的值中减去背景放射性(无DNA的对照组)，不含任何抑制剂的反应得到的放射性作为100%活性。IC50通过百分比活性相对于抑制剂浓度的曲线图确定。为测定SGI-1027对DNMTase活性的抑制，在固定浓度抑制剂(0，2.5，5，和10μM)存在下，测定DNMT1酶的活性，而两个中的一个(Ado-Met或DNA)在特定反应混合物中变化。在固定DNA浓度(500 纳克) 下，Ado-Met的浓度变化范围为25-500 nM。同样的，75 nM Ado-Met下，最终DNA浓度变化范围为25-500纳克。

细胞实验

Cell lines: 大鼠肝癌 H4IIE 细胞

Concentrations: ~300 μM

Incubation Time: 48小时

Method: 大鼠肝癌H4IIE细胞用作测试系统。这些细胞在DMEM中生长，用胚牛血清(10%)和小牛血清(10%)进行增补。将细胞接种在96孔板，48小时后，暴露于0到300微摩尔/升浓度的SGI-1027。溶解性通过Nephalometry技术在给药后立即测定，并在24小时收集细胞前进行测定。经过曝光后，分析细胞或者它们的上层清液(培养基)在细胞分化(碘化丙啶)，膜渗漏(α-GST)，线粒体功能[3-(4,5-二甲基吡啶-2-yl)-2,5-二苯基溴和细胞内ATP]，氧化应激(细胞内 GSH和8-异前列烷)，以及细胞凋亡中的改变。半数最大毒性浓度(TC50)通过级量反应曲线确定。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Datta J, et al. Cancer Res. 2009, 69(10), 4277-4285.

[2] García-Domínguez P, et al. Bioorg Med Chem Lett. 2013, 23(6