产品描述

ML323 是强效的选择性的USP1-UAF1抑制剂，其IC50为76 nM。

靶点（IC50 & Targe）

USP1-UAF1,76nM

体外研究

ML323通过抑制H596细胞中USP1–UAF1活性而抑制PCNA 和 FANCD2去泛素化。此外，ML323通过以两个主要的DNA损伤应答途径(TLS 和 FA)为靶点，增强顺铂在H596细胞和U2OS骨肉瘤细胞中的毒性。[1]

激酶实验

高通量筛选:

对于HTS，USP1-UAF1活性使用泛素-罗丹明110为底物进行检测，泛素的C端甘氨酸和罗丹明之间的酰胺键水解作用导致荧光增加。该测定被小型化为4微升体积，在1,536孔中以定量的HTS模式筛选大约402,701种化合物，每种测试化合物以4到5种浓度范围测定。试验显示出很强的性能，整个筛选中因子Z的平均值为0.8。

细胞实验

Cell lines: H596 细胞

Concentrations: ~30 μM

Incubation Time: 7-12天

Method:对于细胞集落形成实验，细胞以300–500细胞每孔接种于6孔板，并生长过夜。然后将细胞用单独的ML323，单独的顺铂或顺铂与ML323(1:1或 1:4)的组合以指示浓度处理。细胞用等体积的DMSO和生理盐水处理，作为对照组。处理48小时后，加入新鲜的生长培养基，细胞再培养5-10天以形成集落。对于UV联合治疗，细胞用指示浓度的ML323或等体积的DMSO处理。48小时后，移除培养基，细胞在254nm下以指示剂量被照射。加入新鲜生长培养基，细胞再培养5-10天以形成集落。没有被UV照射过，但被ML323或等体积DMSO处理过的细胞作为对照组，并指定为100%。细胞集落形成后，细胞用甲醇固定，并用0.5%结晶紫着色。大于50个细胞的集落被计数。集落的数量通过三个重复的板测定。剂量反应曲线使用GraphPad Prism产生，使用CalcuSyn计算复合指数进行分析，以测定加入固定比率顺铂和USP1-UAF1抑制剂所影响的细胞分数。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Liang Q, et al. Nat Chem Biol. 2014 , 10(4), 298-304.