产品描述

TAK-632是强效的泛Raf抑制剂，无细胞试验中对B-Raf(wt)和C-Raf的IC50分别为8.3 nM and 1.4 nM， 对其他被测试的酶抑制效果较差或者没有效果。

靶点（IC50 & Targe）

Aurora B,66nM

B-Raf,8.3nM

C-Raf,1.4nM

FGFR3,280nM

PDGFRβ,120nM

Orally bioavailable, pan-raf inhibitor that targets both wild-type and mutant forms.

体外研究

TAK-632在黑色素瘤A375细胞系(BRAFV600E)中抑制MEK和ERK的磷酸化，其IC50分别为12 nM和16 nM。在人类黑色素瘤HMVII细胞系(NRASQ61K/BRAFG469V)中，TAK-632对pMEK和pERK显示出很强的抑制性，其IC50分别为49 nM和50 nM。并且，TAK-632在A375和HMVII系中还有很强的抗增殖活性，其GI50分别为66 nM 和200nM。[1]TAK-632诱导RAF二聚化，同时由于从RAF中分离缓慢抑制了RAF的激酶活性。TAK-632和TAK-733联合用药对BRAF- 和NRAS-突变的黑色素瘤细胞起到协同的抗增殖作用。[2]

体内研究

TAK-632在老鼠和狗身上表现出优秀的口服利用率。在老鼠身上进行黑素瘤A375 (BRAFV600E)异种移植和人类黑素瘤HMVII (NRASQ61K/BRAFG469V)异种移植时，TAK-632 (3.9–24.1 mg/kg, p.o.) 表现出剂量依赖的抗癌效果，并且没有严重的体重减少。在NRAS-异变黑素瘤SK-MEL-2 异种移植模型中，TAK-632 (60 or 120 mg/kg, p.o.)也表现出强力的抗癌性，并且没有毒性。[2]

激酶实验

激酶实验:丝氨酸/苏氨酸激酶实验在96孔板中用带γ-33P放射标记的ATP进行。用杆状病毒表达系统表达N端带有Flag标记的BRAF和-RAF蛋白。每个激酶最优的反应条件如下：BRAF(每孔25ng的酶,每孔1μg的1GST-MEK1(K96R),每孔0.1μC的γ-32PATP,室温,反应20分钟);c-RAF(每孔25ng的酶,每孔1μg1GST-MEK1(K96R),每孔0.1μC的γ-32PATP,室温,反应20分钟).酶反应需要25mMHEPES，pH7.5，10mM醋酸镁，1个单位的放射性标记ATP，上述总总反应体积为50μL。在酶反应前，化合物和酶在上述的反应温度下孵育五分钟。酶反应是通过加入ATP开始。以加入10%三氯乙酸(最终浓度）结束反应。γ-33Porγ-32P-磷酸化蛋白质通过一个有细胞收获机的GFC净化板过滤，随后净化板用3%的磷酸洗净。等板干后，添加40μL的MicroScint0。通过TopCount闪烁计数器的计数来记载放射性。

细胞实验

Cell lines: A375和HMVII细胞

Concentrations: ~2 μM

Incubation Time: 72小时

Method:细胞系增殖需要加了10%的高温灭活的牛胎儿血清和抗生素的合适的培养基（生产商推荐），将组织培养器皿放在保持湿润的孵化器中，温度为37°C，并有of 5% CO2和95% air。化合物的抗增殖效果需要用化合物处理细胞系三天，然后观察在Titer-Glo细胞实验中细胞存活的数目来测量。细胞系被放在96孔板中，每个孔板有1500到4000个细胞，同时孔板被放在含有FBS的培养基中过夜培养。18-20小时之后，被稀释成不同浓度的化合物被添加进去在恒温恒湿室培养三天。培养后，细胞增殖情况是由CellTiter-Glo 发光法细胞活力检测试剂盒的。每孔添加 100 bL Titer-Glo细胞显色剂，并额外培养约十分钟。用荧光分析器测算化学荧光值。浓度反应曲线通过计算抑制剂处理组相对于容易处理组的化学荧光值减少来测算的。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 人类黑色素瘤A375(BRAFV600E)异种移植大鼠模型和人类黑色素瘤HMVII(NRASQ61K / BRAFG469V)异种移植大鼠模型。

Formulation: TAK - 632 /邻苯二甲酸羟丙甲纤维素以20:80的比例溶于蒸馏水中。

Dosages: ~24.1 mg/kg

Administration: 口服

(Only for Reference)

参考文献

[1] Okaniwa M, et al. J Med Chem. 2013, 56(16), 6478-6494.

[2] Nakamura A, et al. Cancer Res. 2013, 73(23), 7043-7055.