产品描述

GSK343是一种有效的，选择性EZH2抑制剂，无细胞试验中IC50为4 nM，比作用于EZH1选择性高60倍，比作用于其他组蛋白甲基转移酶选择性高1000倍以上。

靶点（IC50 & Targe）

EZH1,240nM

EZH2,4nM

体外研究

GSK343抑制H3K27 (H3K27me3)三甲基化，在HCC1806肺癌细胞中，IC50为174 nM。GSK343有效抑制乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的细胞增殖，前列腺癌细胞系LNCaP对GSK343最敏感，IC50为 2.9 μM。[1] GSK343显著抑制EOC细胞的生长，EOC细胞在模拟肿瘤体内微环境的3D人工基底膜细胞外基质(ECM)中进行培养。此外，GSK343也会诱导EOC细胞在3D中的凋亡，并显著抑制EOC细胞的侵染。[2]

激酶实验

体外抗组蛋白甲基转移酶生物试验:

使用含5种成分的PRC2复合物(Flag-EZH2，EED，SUZ12，AEBP2，RbAp48)测定抗EZH2的活性。试验方案概括如下：10 mM储存的化合物在100%DMSO由固体制备。11点连续稀释的样板在384孔板(1:3 稀释，柱6和18是等体积的DMSO对照)中制备，使用声分配技术分装到测定备用板以制备一个100 nL的化合物样本和DMSO对照。实验条件由等体积的10 nM EZH2添加物和基底溶液(5 微克µg/毫升HeLa 核小体和0.25 µM [3H]-SAM)组成，使用多点结合分配到试验板中。反应板培育1小时，用包含0.1 mM未标记SAM的0.5毫克/毫升PS-PEI成像珠(RPNQ0098)等体积添加物淬灭。将平板密封，暗适应30分钟，5分钟端点发光图像通过Viewlux成像仪获得。板统计数据，如Z’和背景信号，以及剂量响应曲线通过活性BaseXE进行分析。EZH1的体外生物活性，以作为5个成员PRC2复合物的一部分通过384孔SPA试验进行评估，与EZH2相同。EZH1 和 EZH2的缓冲液成分，试剂配方，复板制备，淬灭条件和数据分析是相同的，终测试浓度为20 nM EZH1，5 μM/mL HeLa 核小体和0.25 μM [3H]-SAM。进一步的数据分析，pIC50的枢轴和可视化由TIBCO Spotfire激活。化合物分布在Reaction Biology Corp. (Malvern, PA)上，以评估他们在组蛋白甲基转移酶试验中的抑制作用。甲基转移酶的活性通过HotSpot技术，微型放射性同位素系滤膜结合测定法进行评估。将抑制剂溶解在二甲基亚砜(DMSO)，测试浓度达到100 uM，最终DMSO浓度为2%。缓冲液包含所给浓度的甲基转移酶，和附表中的优选基底，在化合物存在下预培养10分钟。加入1 uM S-腺苷-L-甲基-3H甲硫氨酸(SAM)启动反应，在30℃下培育60分钟，随后转移到P81滤纸，并在检测前用PBS清洗。

细胞实验

Cell lines: 乳腺癌细胞系(HCC1806, Sk-Br-3, ZR-75-1)，前列腺癌细胞系(DU145, PC3, LNCaP)

Concentrations: ~50 μM

Incubation Time: 6天

Method: 为计算癌细胞系不同的倍增率，最佳的细胞接种通过检测所有细胞系在384孔板以一系列接种密度培养6天经验性确定。随后，细胞以最佳接种密度接种，并使其附着过夜。细胞以一式两份用20点2倍稀释系列的化合物或0.147% DMSO (载体对照)处理，并在37℃于5% CO2中培育6天。然后将细胞用每孔25微升CellTiter-Glo裂解细胞，化学发光用TECAN Safire2酶标仪测定。此外，未处理板中的细胞在加入化合物(T0)定量起始细胞数时采集。处理6天后的CTG值表示成T0值的百分数，标绘成化合物浓度的函数。数据用四参数方程拟合以产生浓度反应曲线，并获得抑制50%生长所需的化合物浓度(gIC50)。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Verma SK, et al. ACS Med Chem Lett. 2012, 3, 1091-1096.

[2] Amatangelo MD, et al. Cell Cycle. 2013, 12(13), 2113-2119.