产品描述

PF-543是一种新型Sphingosine kinase 1 (SphK1， SK1) （鞘氨醇激酶）抑制剂，Ki为3.6 nM。

靶点（IC50 & Targe）

SphK1,3.6nM(Ki)

体外研究

PF543是一种细胞渗透性羟基甲基吡咯烷化合物，其以可逆的，鞘氨醇竞争性方式抑制SphK-1/SphK1催化的鞘氨醇磷酸化，对S1P受体没有亲和力，对Sphk2 (10 μM下抑制6.8%)或 46种其他脂质和蛋白激酶(IC50 >10 μM)的抑制活性很弱。在SphK1过表达的1483头颈癌细胞中，PF-543减少10倍的内源性S1P水平，并成比例增加鞘氨醇水平。PF-543与SphK1可逆结合(k off t1/2=8.5 min)，具有高亲和力，结合常数(Kd)为5 nM。PF543不影响1483，A549，LN229，Jurkat，U937和MCF-7细胞的增殖和存活，尽管会使细胞中S1P/鞘氨醇比率发生巨大改变。在全血中，PF-543是有效的S1P形成抑制剂，表明鞘氨醇激酶的SphK1亚型是人血中S1P的主要来源。[1]

激酶实验

FITC-S1P定量/卡尺测试:一个384孔格式的SphK酶试验，基于FITC-S1P从未反应的FITC-鞘氨醇基质中分离，使用微流控芯片毛细管电泳迁移率系统进行。简而言之，3 nM SphK1–His6与1 μM FITC鞘氨醇，20 μM ATP 和10 μM化合物(DMSO终浓度为2 %) ，在包含100 mM Hepes (pH 7.4)，1 mM MgCl2，0.01% Triton X-100，10% 甘油，100 μM 原钒酸钠和1 mM DTT 的缓冲液中于284孔Matrical MP-101-1-PP 平板中培育1小时。反应混合物(10 微升) 中加入20微升30 mM EDTA和含0.15%涂层试剂3的100 mM Hepes淬灭反应，每个反应(几纳升)的小等分试样在Caliper LabChip 3000仪器上，-1.5 psi (psi=6.9 kPa)压力，-1900 V下游电压和0.2秒的时间内进行分析。磷酸化荧光产物和未磷酸化荧光底物表现为独特的峰，并使用Caliper数据进行定量。

细胞实验

Cell lines: 1483，A549，LN229，Jurkat，U937，MCF-7

Concentrations: ~1 μM

Incubation Time: 7天

Method: CellTiter-Glo 试验

(Only for Reference)

参考文献

[1] Schnute ME, et al. Biochem J, 2012, 444(1), 79-88.