维生素B12（钴胺素）是唯一含金属元素的维生素，其在278nm、361nm、550nm波长处有最大吸收。通过这些吸收峰和吸光度比值可以进行定性鉴定，而通过测量最大吸收波长下的吸光度可以进行定量分析。

    1、定性分析 维生素B12的三个吸收峰分别位于278nm、361nm、550nm。定性的标准比值为A361/A278应在1.70～1.88范围内，A361/A550应在3.15～3.45范围内。

    2、定量分析 定量分析可以通过吸收系数法或标准曲线法进行。

    1.吸收系数法：根据朗伯-比尔定律，利用361nm处的吸光度和比吸光系数（207）计算维生素B12的含量。

    2.标准曲线法：配制维生素B12标准系列，绘制吸光度对浓度的标准曲线，然后通过样品的吸光度计算其含量。

实验试剂

实验步骤

1、定性鉴别

    将维生素B12注射针剂定容至25.0mL，置于1cm比色皿中，在278nm、361nm、550nm处测定吸光度值，并计算比值以进行定性鉴定。

2、定量分析

    1)吸收系数法：在361nm波长下，以蒸馏水为空白测定吸光度，并计算维生素B12含量及标示量百分含量。

    2)标准曲线法：配制不同浓度的维生素B12标准溶液，测定吸光度并绘制标准曲线。测定样品吸光度后，根据标准曲线计算含量。

实验小贴士:

实验中，参比溶液是如何选择的？为什么？

    答：参比溶液通常选择与样品相同的溶剂，但不含待测物质。这是为了消除溶剂和仪器因素对吸光度测量的影响，确保测量结果的准确性。

相关阅读