真核细胞中RNA的定位与其功能有密切联系，如亚细胞区域定位的mRNA可进行局部蛋白质合成。当前研究RNA定位的技术主要基于成像或生化分离，但这些技术在通量或空间特异性等方面存在不足。

近年来，以APEX（The engineered ascorbate peroxidase）为代表的邻近化学标记技术迅速发展，实现了活细胞环境内特定空间区域蛋白质的邻近标记，避免传统物理分离细胞器方法造成的假阳性^[1]。

2019年，多位科学家将APEX邻近标记技术拓展到转录组领域，开发出APEX-seq技术^[2-3]，该技术利用过氧化物酶APEX催化生物素-苯酚（BP）产生的高活性自由基中间体，对邻近RNA分子进行共价加成反应，从而实现高空间特异性标记。

尽管APEX-seq具有较高空间特异性，但BP探针对RNA分子的标记效率较低。为提高APEX2对RNA分子的标记效率，北京大学邹鹏研究员课题组设计并合成了生物素-苯胺探针（Biotin-Aniline，Btn-An）^[4]。Btn-An具有较高的标记活性，在体外标记RNA的信号强度约为BP的20倍。

邹鹏研究员课题组已成功在真核细胞中利用Btn-An对线粒体转录组进行邻近标记（图1），并利用RNA-seq技术证明Btn-An具有较高的空间特异性和覆盖度。

图1 Scheme of live-cell RNA labeling with Btn-An in the mitochondria^[4].

邹鹏研究员科研成果转化，百灵威独家提供应用于真核细胞体系中的RNA邻近标记探针——Btn-An。

Biotin-aniline, 98%

生物素-苯胺

769933-15-5

9198266
10 MG 50 MG 100 MG

参考文献

1. Rhee, H.-W., Zou, P., Udeshi, N.D., Martell, J.D., Mootha, V.K., Carr, S.A., and Ting, A.Y. (2013). Proteomic Mapping of Mitochondria in Living Cells via Spatially Restricted Enzymatic Tagging. Science 339, 1328-1331.
2. Fazal, F.M., Han, S., Parker, K.R., Kaewsapsak, P., Xu, J., Boettiger, A.N., Chang, H.Y., and Ting, A.Y. (2019). Atlas of Subcellular RNA Localization Revealed by APEX-Seq. Cell 178, 473-490.
3. Padron, A., Iwasaki, S., and Ingolia, N.T. (2019). Proximity RNA Labeling by APEX-Seq Reveals the Organization of Translation Initiation Complexes and Repressive RNA Granules. Mol Cell 75, 875-887.
4. Zhou, Y., Wang, G., Wang, P.C., Li, Z.Y., Yue, T.Q., Wang, J.B., and Zou, P. (2019). Expanding APEX2 Substrates for Proximity-Dependent Labeling of Nucleic Acids and Proteins in Living Cells. Angew Chem Int Edit 58, 11763-11767.

相关文章