免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，通过化学反应使标记物显色，从而在细胞或组织切片中定位特定抗原的技术。 在免疫组化中，通常使用特异性抗体来检测组织样本中的目标蛋白质。
    根据染色技术不同，免疫组化可分为酶联免疫组化（ELIHC）和荧光免疫组化（FLIHC）。
    根据标记物不同，可分为直接免疫组化（直接使用标记有酶或荧光染料的抗体与抗原反应）和间接免疫组化（使用未标记的初级抗体与抗原反应，然后使用标记有酶或荧光染料的次级抗体与初级抗体结合）。
     常用的PAP/APPAP法、LSAB（S-P）法、SABC法和CSA法等属于间接法。相对来说，直接法特异性高，敏感性低，而间接法则敏感性高，特异性低。

1、PAP法：过氧化物酶抗过氧化物酶法

    通过制备具有高特异性的抗过氧化物酶抗体（简称抗酶抗体），并在抗酶抗体中加入过量的过氧化物酶（如辣根过氧化物酶HRP），使过氧化物酶充分结合在抗酶抗体上形成可溶性的PAP复合物。

• 染色步骤

1. （1）切片脱蜡水化，冰冻切片和细胞涂片不需脱蜡，固定后水洗。
2. （2）3% H2O2水溶液处理10min。
3. （3）PBS洗5min。
4. （4）加非免疫动物血清孵育15min。
5. （5）加第一抗体孵育60min。
6. （6）PBS洗5min，3次。
7. （7）加第二抗体孵育30min。
8. （8）PBS洗5min，3次。
9. （9）加PAP复合物孵育30min。
10. （10）PBS洗5min，3次。
11. （11）DAB-H2O2显色1～5min。
12. （12）水洗，复染，常规脱水透明，封片。

2、APPAP法：碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法

    APPAP法的原理、操作步骤等和PAP法基本相同，不同的是，在染色操作过程中不需要用H2O2消除内源性过氧化物酶，所用的显色剂为固蓝、固红或BCIP/NBT等。

3、ABC法：卵白素-生物素复合物法

    利用卵白素和生物素高亲和力的生物学特性，用生物素与过氧化物酶（HRP）结合获得生物素化过氧化物酶，生物素化过氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-过氧化物酶复合物即ABC复合物。

4、LSAB（或者SP）法：标记抗生物素蛋白链菌素-生物素法

    和ABC法相似，不同处是在第二抗体后ABC法用ABC复合物而LSAB法用标记了过氧化物酶的抗生物素蛋白链菌素（streptavidin，SA）。SA的敏感性比ABC高，反应所需的时间比ABC短。