三(3-羟丙基)膦(TPP或THPP)和三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)可溶于水,用作中性巯基还原剂,还原性强于二硫苏糖醇(DTT)。THPP和TCEP还可用于固定化金属亲和色谱(IMAC),不会还原涉及的金属。
在生物系统中,保持蛋白质和多肽中巯基的还原状态对生物活性非常重要。常用二硫化物作为还原剂,如2-巯基乙醇和DTT类硫醇。 但DTT可能会干扰巯基(SH)的反应,也可能在金属亲和柱中被氧化,因此在对多肽修饰或纯化前需将其去除。
三烷基膦对二硫键有高选择性,但通常不溶于水且有难闻气味。 因此,
高水溶性的THPP和TCEP成为DTT理想替代品,并且
在硫醇修饰前无需去除。此外,
THPP在较宽pH范围内都有效[1] !
应用介绍
THPP和TCEP能破坏蛋白质内部和蛋白质之间的二硫键,可应用于许多生物学实验,例如在分子诊断中用于蛋白质裂解和/或沉淀,以及基因芯片和微阵列。THPP和TCEP已实际应用于商品化的酶试剂盒生产中,例如蛋白质提取[2],特定氨基酸序列裂解[3]和凝胶内胰蛋白酶消化[4]。
THPP还可用于S-保护半胱氨酸的脱保护,亚砜、N-氧化物以及其他硫和氮化合物的脱氧
[5],也是多肽合成用试剂,特别是在Mitsunobu和Staudinger反应中
[6]。
TCEP还适用于硫化物、二硫化物、次氯酸根离子、碘、碘酸根离子、亚砜、N-氧化物、叠氮化物的定量分析[7],以及有机合成中选择性还原二硫化物[8]。
参考文献:
- US Patent Application 60/469, 821.
- Novagen Protocol TB245 Rev. E 0304, BugBuster® Protein Extraction Reagent; Novagen User Protocol TB316 Rev. B 0804, YeastBuster™ Protein Extraction Reagent.
- Takara HRV 3C Protease Product Manual v201304Da.
- Agilent 5188-2749Protein In-Gel Tryptic Digestion Kit Instructions.
- G.A. Olah, B.G.B. Gupta, S.. Narang, SYnthesis. 137 (1978)
- (a.) I. Bosch, F. Urpf, J. Vilarrasa, J. Chem. Soc., Chem. Commun. 91(1995);
(b) H.Fuwa e.a., Tetrahedron Lett. 45 2323 (2004); J. S. Davies, J. Peptide Sci. 9 471-501 (2003).
- A.-M.Faucher, C. Grand-Maitre, Synth. Commun. 33 3503 (2003).
- J.A. Burns, J.C. Butler, J.Moran, G.M. Whitesides, J. Org. Chem. 1991, 56, 2648-2650.
相关产品