乳粉中三聚氰胺的液相色谱-紫外检测器检测方案-百灵威

三聚氰胺俗称密胺、蛋白精，分子式为C3H6N6，是豆、乳类制品中的非法食品添加剂，曾作为蛋白质的廉价代替物被非法添加进奶粉等食品中，造成了严重的社会危害。目前，三聚氰胺已严禁直接用于食品，并有相关法律法规强调企业在购入生乳原料、原料乳粉及其加工制品时需检测三聚氰胺含量。

本方案参照《GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》中第一法，以乳粉为基质进行了加标验证，高中低三水平下，样品的回收率均大于80%，RSD＜10%，满足标准要求，可供参考。

样品前处理

一、样品提取

准确称取1g样品于干净离心管中，加入7.5mL 5%三氯乙酸溶液和2.5mL乙腈，涡旋混匀后超声提取10min，再振荡提取10min，12000r/min离心5min，取上清液于另一干净离心管中，重复上述操作一次，合并两次提取液，若提取液浑浊可多加一次低温离心，取上清液5mL，加入5mL水，混匀，作为待净化液，待过柱净化。

二、样品净化（2471246MCX小柱，60mg/3mL）

活化：依次用5mL甲醇和5mL水活化；
上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液；
淋洗：依次用5mL水和5mL甲醇淋洗，抽干小柱；
洗脱：6mL 8%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于50℃氮吹仪吹干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混匀1min，过尼龙滤膜，上机测定。

三、标准曲线配置

取适宜浓度的标准品，用流动相配制成上机浓度分别为200μg/L，500μg/L，1000μg/L，2000μg/L，5000μg/L，10000μg/L的标点，得到标准曲线。

分析检测

一、液相色谱条件

色谱柱：C18-H液相色谱柱（4.6mm×250mm，5µm）
流动相：A：离子对缓冲试剂 B：乙腈
流速：1.0mL/min
柱温：40℃
进样量：20µL
检测器：紫外检测器
检测波长：240nm
洗脱方式：A：B=85:15

三、检测结果

图1 1000μg/L三聚氰胺标准品液相色谱图

图2 添加水平为2mg/kg时乳粉中三聚氰胺液相色谱图

图3 三聚氰胺校准曲线

图4 三聚氰胺光谱图

表1 乳粉中三聚氰胺加标回收实验结果

产品列表

品名	分类	货号
Melamine;1000 μg/mL in Water:Diethylamine (80:20) 三聚氰胺/蛋白精	标准品	FDA-PROP-001A
MCX 固相萃取小柱 , 填料60 mg, 柱体积3 ml, 50 支/盒	耗材	2471246
有机系尼龙66针式过滤器	耗材	9215892
样品瓶瓶盖 , 9 mm, 红色PTFE/白色硅胶隔垫, 蓝色螺口开口瓶盖	耗材	940292
1-Octanesulfonic acid sodium salt, 99.5% 1-辛烷磺酸钠盐	离子对色谱用试剂	194500
Acetonitrile, 99.9%, LC-MS 乙腈	试剂	932537
Methanol, 99.9%, LC-MS 甲醇	试剂	952707
Ammonium hydroxide, for analysis, 25-28% 氢氧化铵	试剂	921637

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