美蓝染色法
吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液配制
* A液:美蓝(methylene blue) 0.6g、95%酒精 30mL;
* B液:KOH 0.01g、蒸馏水 100mL;
* 分别配制A液和B液,配好后混合即可。
染色
将涂片在火焰上固定、待冷。滴加染液,染1-3min,水洗、待干、镜检。
结果
菌体呈蓝色。
革兰氏染色法
草酸铵结晶紫染液配制
* A液:结晶紫(crystal violet) 2g、95%酒精 20mL;
* B液:草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g、蒸馏水 80mL;
* 混合A、B两液,静置48h后使用。
卢戈氏(Lugol)碘液配制
* 碘片 1.0g、碘化钾 2.0g、蒸馏水 300mL;
* 先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。
番红复染液配制
* 番红(safranine O) 2.5g、95%酒精 100mL;
* 取上述配好的番红酒精溶液10mL与80mL蒸馏水混匀即成。
染色
* 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗;
* 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;
* 滴加95%酒精脱色,约30s;或将酒精滴满整个涂片,立即去除,再次滴加酒精,脱色10s;
* 水洗,滴加复染液,复染1min。水洗、待干、镜检。
结果
革兰氏阳性菌呈紫色;革兰氏阴性菌呈红色。
柯氏染色法
0.5%番红液配制
* 番红 0.5g;
* 蒸馏水 100mL。
0.5%孔雀绿液配制
* 孔雀绿(malachite green) 0.5g;
* 蒸馏水 100mL。
染色
* 将涂片在火焰上固定,滴加0.5%番红液,并加热至出现气泡,约2~3min,水洗;
* 滴加0.5%孔雀绿液,复染40~50s。水洗、待干、镜检。
结果
布鲁氏菌呈红色,其他细菌及细胞呈绿色。
鞭毛染色法
甲液配制
*称丹宁酸5g、氯化高铁 1.5g,溶于100mL 蒸馏水中,待溶解后加入1%氢氧化钠溶液 1mL和15%的甲醛溶液 2mL。
乙液配制
*称2g 硝酸银溶于100mL 蒸馏水中;在90mL 乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清;
*然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心);
*滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡。
注意:乙液当天配,当天使用,2~3d基本无效。
染色
* 在风干的载玻片上滴加甲液,4~6min后,用蒸馏水轻轻冲净;
* 再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约30s(加热时注意勿使出现干燥面);
* 在菌体多的部位可呈深褐色到黑色,停止加热,用水冲净,干后镜检。
结果
菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
奥尔特氏荚膜染色法
染液配制
* 番红 3g;
* 蒸馏水 100mL;
* 用乳钵研磨溶解。
染色
* 将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸汽后,继续染3min;
* 水洗、待干、镜检。
结果
炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色。
瑞氏(美蓝-伊红)染色法
染液配制
* 瑞氏色素 0.1g;
* 甲醇 60mL;
* 用乳钵研磨溶解。
染色
* 涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min;
* 加入等量蒸馏水(pH 6.5),染色3~5min;
* 用蒸馏水冲洗、待干、镜检。
结果
细菌呈蓝色,组织细胞胞浆呈红色,细胞呈核蓝色或紫色。
芽孢染色法
孔雀绿染液配制
* 孔雀绿(malachite green) 5g;
* 蒸馏水 100mL。
番红水溶液配制
* 番红 0.5g;
* 蒸馏水 100mL。
苯酚品红溶液配制
* 碱性品红 3g溶于100mL 70%酒精中 ;
* 取上述溶液10mL与100mL 5%的苯酚溶液混合,过滤备用。
黑色素(nigrosin)溶液配制
* 水溶性黑色素 10g;
* 蒸馏水 100mL;
* 称取10g 黑色素溶于100mL 蒸馏水中,置沸水浴中30min后,滤纸过滤2次,补加水到100mL,加0.5mL 甲醛,备用。
染色
* 将培养24h左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂片、干燥、固定;
*滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上;
* 用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4-5min。这一步也可不加热,改用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染10min;
* 倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止;
* 用番红水溶液复染1min,水洗;
* 待干燥后,置油镜观察。
结果
芽孢呈绿色,菌体呈红色。