分子生物学常用试剂的配制
时间: 2020-06-17
作者: 百灵威
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磷酸缓冲盐溶液（PBS）
- 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4；
- 用HCl调节溶液的pH 值至 7.4，加水定容至 1 L；
- 高压蒸汽灭菌 20min，保存于室温。
0.5mol/L EDTA (pH 8.0)
- 800mL 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌；
- 用NaOH调节溶液pH值至8.0；
- 定容至1L，分装后高压灭菌备用。
1mol/L Tris-HCl
- 在800ml水中溶解121.1g Tris碱，加入浓HCl调节pH至所需值（pH7.4：约70ml HCl；pH7.6：约60ml HCl；pH8.0：约42mL HCl）
- 加水定容至1L，分装后高压灭菌。
10 x TE 缓冲液
- 量取100mL 1mol/L Tris-HCl（pH分别为7.4、7.6、8.0）、20mL 500mM EDTA（pH 8.0），置于1L烧杯中：
- 烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合；
- 定容至1L，高温高压灭菌；
- 室温保存。
50 x TAE（Tris-乙酸）缓冲液
- 称量Tris碱242g，EDTA 18.612g于1L烧杯中；
- 向烧杯中加入约800mL去离子水，充分搅拌均匀；
- 加入57.1mL的冰乙酸，充分溶解；
- 用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。
5 x TBE（Tris-硼酸）缓冲液
- 称量54gTris碱，27.5g硼酸，20mL 0.5mol/L EDTA；
- 用无菌水溶解混匀，NaOH调pH至8.0，定容至1L，室温保存。
30%丙烯酰胺
- 将29g 丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶于总体积为60mL的水中，加热至37℃溶解；
- 补加水至终体积为100mL；
- 用0.45μm滤器过滤除菌；
- 确保溶液的pH值不大于7.0，置棕色瓶中室温保存。
5 x Tris-甘氨酸缓冲液
- 称取15.1g Tris 碱，94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3），50mL 10%SDS（电泳级）；
- 用无菌水溶解混匀，定容至1L，室温保存。
5×SDS-PAGE Loading Buffer（5mL）
- 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 1.25mL；甘油2.5mL；称取SDS固体粉末0.5g；溴酚兰25mg；
- 加入去离子水溶解后定容至5mL；
- 小份（500 μL）分装后，于室温保存。
- 使用前将25 μL的β-巯基乙醇加入到每小份中去。
- 加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。
10%（W/V）过硫酸铵（配制量10mL）
- 称取1g过硫酸铵；
- 加入10mL去离子水后搅拌溶解；
- 贮存于4℃。
溴化乙锭（EB）（10mg/mL）（配制量100mL）
- 100mL水中加入1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解；
- 然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
琼脂糖凝胶
- 根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液（TAE/TBE）；
- 用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解；
- 加入适量 EB 混匀；
- 适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子；
- 待凝胶完全凝结，拔除梳子。
注意：凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则可用玻璃棒去除；不可过早拔除梳子，应待完全凝结。
乙酸钾溶液（用于碱裂解）
- 在60mL 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5mL冰乙酸和28.5mL水；
- 配制成钾浓度为3mol/L，乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
3mol/L 乙酸钠（pH5.2和7.0）
- 在800mL水中溶解408.1g 三水乙酸钠；
- 用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1L；
- 分装后高压灭菌。
酚：氯仿
- 把酚和氯仿等体积混合；
- 用0.1mol/L Tris-HCl（pH7.6）抽提几次以平衡这一混合物；
- 置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/L Tris-HCl（pH7.6）液层；
- 保存于4℃。
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