荧光素酶报告基因系统（Luciferase-based reporter gene system）被广泛应用于细胞内信号通路、转录因子调节、受体功能研究、高通量药物筛选等。

胞内荧光素酶的表达能定量检测，其工作原理是荧光素酶在底物荧光素（Luciferin）、ATP和分子氧的存在下，能将荧光素氧化成氧化荧光素（Oxyluciferin），从而产生自发的冷光，在过量的荧光素和ATP存在时，发光的强度与荧光素酶的量成正相关（图1）。

图1 荧光素酶催化荧光素发光原理

百灵威提供利用专有技术成功开发出NBA-Glo^TM稳定型荧光素酶检测试剂盒。该试剂盒为均质即用型（Homogeneous ready for use）试剂，集细胞裂解、荧光素酶检测于一体，通过“加入-混合-检测”免去了先裂解后检测的实验步骤，而且稳定的“辉光”更适合高通量样品的检测。

产品特点

• ⚫ 更高的稳定性：稳定的“辉光”信号半衰期超过4h（图2）。
• ⚫ 更高的灵敏度：能检测出100个荧光素酶表达细胞（图3）。
• ⚫ 更宽的动态量程：4个数量级的动态量程范围内维持稳定的线性关系。
• ⚫ 更便捷的实验步骤：一步法 “加入-混合-检测”，操作简单。
• ⚫ 适合于高通量检测：适合于超高通量或384孔板检测。

图2 NBA-Glo^TM稳定型荧光素酶检测试剂盒信号稳定性测试：6x10⁵/ml的HEK293细胞接种于6孔细胞培养板中；24h后转染荧光素酶表达质粒；转染后48h，将细胞转到96孔板中，1x10⁵cells/孔；24h后，取出细胞在室温平衡10分钟，然后加入平衡至室温的NBA-Glo^TM稳定型荧光素酶检测试剂，50µl/孔，混匀；在不同时间点连续读取荧光值。

图3 NBA-Glo^TM稳定型荧光素酶检测试剂盒灵敏度测试：不同数量的表达luciferase酶的HEK293细胞接种于96孔透明底白板，100µl/孔；过夜培养后进行酶活性检测，读取相对荧光强度。

图4是转染了报告基因载体的细胞铺于384孔板，细胞密度5x10E⁵/ml。加不同浓度的化合物，培养24h。然后分別使用NBA-Glo^TM稳定型荧光素酶试剂盒和国际品牌Px公司产品检测酶活性，结果显示两产品IC50差异均在2倍之内。

图 4 NBA-Glo^TM稳定型荧光素酶检测试剂盒细胞报告基因检测。结果显示两产品IC50差异均在2倍之内。化合物A，化合物B分别代表强活性及弱活性化合物。

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