维生素C是蔬菜中重要的营养成分，其含量直接影响蔬菜的营养价值和健康效果。高效液相色谱法（HPLC）是一种用于分离和分析极性和非极性化合物的色谱技术，具有快速、灵敏、准确的特点。外标法是通过标准曲线法或标准加入法来计算待测物质的含量。

实验试剂

品名	CAS	货号
Oxalic acid, 99%, for synthesis, anhydrous 草酸	144-62-7	992551
L-Ascorbic acid, 99%, for analysis L-抗坏血酸	50-81-7	933460

实验步骤

1、流动相的配制

    称取H₂C₂O₄•2H₂O，溶解后过滤。

2、标准溶液的制备

    准确称取维生素C，加入草酸溶液，稀释后过滤，配制成标准溶液。

3、试样溶液的制备

    取新鲜蔬菜，切碎、混匀，加入草酸溶液，超声波萃取，离心分离，过滤备用。

4、色谱分析条件

    1)色谱柱：C18（3.9 mm×250 mm，Nova-pak）。

    2)流动相：0.1%草酸。

    3)流速：0.6mL•min⁻¹。

    4)紫外检测波长：254nm。

    5)进样体积：20μL。

5、系列标准溶液和试样溶液的测定

    分别吸取标准溶液和试样溶液，注入色谱柱进行色谱分离，记录色谱峰面积，计算含量。

实验小贴士:

1、本实验中如何确定试样中维生素C的色谱峰？

    通过与标准溶液的色谱峰进行比较，确定试样中维生素C的色谱峰。

2、标准曲线法中是否可以用峰高代替峰面积进行定量分析？为什么？

    可以用峰高代替峰面积进行定量分析，因为峰高与峰面积成正比。然而，峰面积更准确，因为它不依赖于色谱峰的形状，且对基线漂移和噪声的影响较小。因此，如果可能，建议使用峰面积进行定量分析。

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