甲硝唑是一种常用的抗生素，用于治疗由厌氧菌引起的感染。高效液相色谱法（HPLC）是一种用于分离和分析极性和非极性化合物的色谱技术，具有快速、灵敏、准确的特点。内标法是一种常用的定量分析方法，通过在样品中加入内标物质，根据内标物与待测物质的峰面积比计算待测物质的含量。

实验试剂

品名	CAS	货号
Oxytetracycline 土霉素	79-57-2	529443
Metronidazole, 99%, a nitroimidazole antibiotic medication used particularly for anaerobic bacteria and protozoa 甲硝唑	443-48-1	274238
Methanol, 99.5%, for analysis 甲醇	67-56-1	949300 危化品

实验步骤

1、色谱条件的选择

    1)波长的选择：选择甲硝唑的最大吸收波长作为测定波长。

    2)流动相的选择：使用甲醇-草酸水溶液（0.002mol•L⁻¹）作为流动相。

2、内标物溶液的配制

    准确称取土霉素，制成100mg•L⁻¹的内标物溶液。

3、对照品溶液的制备

    准确称取甲硝唑，制成100mg•L⁻¹的对照溶液。

4、样品溶液的制备

    取甲硝唑片研细，准确称取适量，制成供试品溶液。

5、甲硝唑和土霉素纯物质保留时间测定

    记录内标物和对照品的保留时间。

6、校正因子的测定

    混合内标物和对照品溶液，计算相对校正因子。

7、样品的测定

    混合样品溶液和内标物溶液，进样分析。

实验小贴士:

用内标法进行定量分析时，内标物的选择应符合什么要求？

    内标物的选择应符合以下要求：与样品中的待测物质在色谱条件下的分离度良好；与待测物质在化学性质上相似；不与待测物质发生反应；内标物在样品中的添加量与待测物质的量比适当。

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