D-荧光素钠盐，作为荧光素酶的经典底物，广泛应用于生物技术领域，如体内活体成像。其作用机制是在ATP和荧光素酶的共同作用下，底物D-荧光素钠盐被氧化并发光。当底物浓度增加时，所发出的光量子数与荧光素酶的浓度成正比（图1）。通过将含有荧光素酶基因（Luc）的质粒转导入细胞，并将其引入实验动物，如小鼠和大鼠体内，随后注入D-荧光素，利用生物发光成像技术来观测光强的变化，实现对疾病进程或药物治疗效果的实时监控。
具体应用：
    1)体内活体成像：荧光素酶标记的肿瘤细胞、干细胞等注入研究动物模型如大小鼠内进行研究，从而进行实时疾病进程或药效的监测。
    2)体外研究：包括荧光素酶和ATP水平分析、报告基因分析、高通量测序和各种污染检测。

使用方法

体外生物发光检测

（1）取1g D-荧光素钠盐，加入33.3ml蒸馏水溶解，制备成100 mmol/L的储存液（200×，浓度为30 mg/ml）。充分混合后，即可直接使用，或分装并于-20℃条件下冷藏保存。
（2）将储存液以1:200的比例与组织培养基混合，制备工作液（终浓度 150μg/mL）。
（3）移除培养细胞上的培养基。
（4）进行图像分析前，向细胞中加入等体积的1×荧光素工作液，随后进行图像分析。若需增强信号，可将细胞在37℃条件下短暂孵育后进行检测。

活体成像分析检测

1）用无菌的 PBS（无 Mg²⁺、Ca²⁺）配制 D-荧光素钠盐工作液(15mg/mL)，0.2μm 滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。
2）注射量取决于注射方式，具体如下：
静脉注射（25-27 gauge 针头）：以每克体重10 uL的比例，计算并添加相应量的15 mg/mL荧光素工作液；
腹腔注射（25-27 gauge 针头）：以每克体重10 uL的比例，计算并添加相应量的15 mg/mL荧光素工作液；
肌肉注射（27 gauge 针头）：50 uL，浓度为 1–2 mg/mL 荧光素工作液；
鼻内注射（pipette）：50 uL，浓度为 3 mg/mL 荧光素工作液。
3）注射入体内 5-10 min后，进行成像分析。

产品列表

品名	CAS	货号
D-Luciferin sodium salt, 98% D-荧光素钠盐	103404-75-7	308290

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D-(-)-Luciferin, 99% D-(-)-荧光素	2591-17-5	337806
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