RPMI 1640培养基是一种化学成分确定的基础培养基，含有 L-谷氨酰胺，适合多种哺乳动物贴壁细胞的生长。它不含蛋白质、脂类或任何生长因子，因此需搭配血清使用。

百灵威提供RPMI 1640液体培养基和干粉2种形式：

• 批次间稳定；
• 质量稳定（见表1）。

表1 RPMI 1640 细胞培养基指标

细胞复苏

1. 将 RPMI 1640 培养基置于 37℃，5% CO₂的环境中预热 30min；
2. 取出细胞冻存管，迅速转移至 37℃水浴中融化；
3. 将融化的细胞悬液转移至含有 5-10ml 新鲜培养基的无菌离心管中；
4. 800rpm 低速离心5min 后小心去掉上清；
5. 用适量新鲜培养基重悬细胞，并转移至合适的培养容器中，添加适量血清，轻轻摇晃容器使细胞混匀后于37℃，5% CO₂环境中进行培养；
6. 在显微镜下观察当贴壁单层并且汇合度在 80%左右，进行传代。

细胞培养

1. 取显微镜下观察生长良好、贴壁单层并且汇合度在80%左右的贴壁细胞，根据需要选择合适体积培养容器；
2. 预热 RPMI 1640 培养基：将培养基置于 37℃，5% CO₂的环境中进行预热 30min；
3. 从培养容器中吸出旧培养基并丢弃；
4. 用不含钙、镁的平衡盐溶液冲洗细胞 3 次；
5. 向培养容器中加入 0.25% 胰蛋白酶-EDTA，室温孵育 2min(实际孵育时间因细胞株而异）；
6. 显微镜下观察解离情况，当解离程度超过90%时，倾斜培养容器使细胞上液尽快流出，随后加入适量预热的培养基吹打细胞层表面，使其分散；
7. 800rpm 低速离心 5min 后小心去掉上清，使用适量预热的培养基重悬细胞并分装至新的培养容器中，随后加入适量新鲜培养基与血清；
8. 轻轻摇晃容器使细胞混匀后转移至 37℃，5% CO₂环境中进行培养。

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