植物油中黄曲霉毒素B1的测定-百灵威

黄曲霉毒素（AFTB1）可污染多种农作物，其中以花生、玉米等最为严重。以被污染的农产品为原料生产的食用油，黄曲霉毒素含量可能出现异常，超过GB2761-2017中规定的花生油和玉米油AFTB1限量20μg/kg的标准。

免疫亲和法具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。本方案建立了免疫亲和柱净化结合液相色谱串联质谱法测定AFTB1含量的分析方法。试样提取后，由免疫亲和柱净化，通过质谱分析，同位素内标法定量。经验证，加标回收率90-100%，RSD值小于5%，满足测试要求。-120%之间，RSD小于5%，能够作为豆芽中生长素检测的参考方法。

样品前处理

一、样品提取

称取样本5.0g（精确至0.01g）花生油于50mL离心管（带盖）中，加入100μL同位素内标工作液（10ng/mL）后静。加入20mL乙腈水溶液（84%+16%），涡旋振荡提取20min，8000r/min离心5.0min。取4.0mL提取滤液，加入46mLPBS溶液，混匀待净化。

二、样品净化（966011黄曲霉毒素B1免疫亲和柱 , 3 ml）

将免疫亲和柱连接于固相萃取装置上，将上述全部待净化稀释液过黄曲霉毒素免疫亲和柱，流速控制在1~2滴/秒。然后依次加入5.0mL PBS缓冲溶液和5.0mL一级水淋洗小柱，弃去全部流出液，压干。用1.0mL甲醇进行洗脱，关闭阀门浸泡30s，然后洗脱至进样小瓶中，LC-MS/MS测试。

三、过程空白实验

不称取试样，按上述步骤进行实验。

分析检测

一、液相色谱条件

色谱柱：C18柱 (2.1mm×50mm,1.7µm)
流动相：A：5mmol/L 乙酸铵 B：0.1%甲酸的甲醇溶液
流速：0.3mL/min
柱温：30℃
进样量：5µL
洗脱方式：梯度洗脱，见表1

表1：梯度洗脱程序表

二、质谱条件

离子源：HESI
扫描方式：正离子模式（ESI+）
鞘气压力：30arb
辅气压力：8arb
离子传输管：300℃
辅气温度：350℃
组分、保留时间及特征离子对照表见表2

表2：组分、保留时间、特征离子对照表（*为定量离子）

三、检测结果

表3 花生油中黄曲霉毒素B1加标回收实验结果

图1 黄曲霉毒素B1校准点（1.0μg/L）和同位素内标的定量离子提取色谱图

图2 花生油中黄曲霉毒素B1（本底值）和同位素内标的定量离子提取色谱图

图3 花生油中黄曲霉毒素B1（加标浓度1.00μg/kg）和同位素内标的定量离子提取色谱图

产品列表

品名	分类	货号
Aflatoxin B1, 98%, from Aspergillus flavus 黄曲霉毒素 B1 , 98% , 来源于黄曲霉	标准品	477564
Phosphate buffered saline, 10×, BioUltra, pH7.2-7.4 PBS 缓冲液	试剂	1914020
Formic acid, 98%, for LC-MS 甲酸	试剂	942988
Methanol, 99.9%, LC-MS 甲醇	试剂	952707
Ammonium acetate, 98%, for analysis 乙酸铵	试剂	925211
Acetonitrile, 99.9%, LC-MS 乙腈	试剂	932537
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱 , 1 ml	耗材	2660423
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱 , 3 ml	耗材	966011
样品瓶瓶盖 , 9 mm, 红色PTFE/白色硅胶隔垫, 蓝色螺口开口瓶盖	耗材	940292
短螺纹样品瓶 , 2ml, 9mm, 11.6×32mm, 棕色, 广口, 带书写签	耗材	902590
离心管, 50 mL	耗材	966183

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