产品描述

Idelalisib (CAL-101, GS-1101) 是选择性p110δ抑制剂，在无细胞试验中IC50为 2.5 nM；对 p110δ 表现出的选择性是对 p110α/β/γ 的 40 到 300 倍，对p110δ的选择性是对 C2β，hVPS34，DNA-PK 和 mTOR的400到4000倍。

靶点（IC50 & Targe）

hVps34,978nM

p110α,820nM

p110β,565nM

p110γ,89nM

p110δ,2.5nM

体外研究

CAL-101 对p110α, p110β,和p110γ作用效果不大。CAL-101作用于原代嗜碱细胞特定阻断FcϵR1 p110δ调节的 CD63表达，EC50 为8 nM。与急性髓性白血病(AML) 和骨髓增生性肿瘤(MPN) 细胞相比，CAL-101 作用于B-cell急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL) 细胞时显示更强的活性。CAL-101 作用于SU-DHL-5, KARPAS-422 和CCRF-SB细胞，降低pAktS473, pAktT308, 和下游靶点S6， EC50为0.1到1.0 μM。 [1] CAL-101 作用于CLL细胞，诱导选择性细胞毒性，不是通过突变状态或间期细胞遗传学,主要通过caspase依赖机制。与正常B细胞相比，CAL-101作用于CLL 细胞优先产生细胞毒性，和LY294002相比，作用于其他造血细胞不会产生毒性。CAL-101 作用于T 细胞和天然杀伤细胞 缺乏直接的细胞毒性潜能。CAL-101抑制炎症细胞因子的产生,比如 IL-6, IL-10, TNF-α,和IFN-γ,且激活诱导的细胞因子,如CD40L。CAL-101 也抗CD40L调节的CLL细胞存活。[2] CAL-101 作用于L1236和L591细胞, 诱导细胞在G1期积累，在S期下降，说明 CAL-101可以作为治疗霍杰金淋巴瘤(HL)的一种新策略。[3]

激酶实验

PI3K实验:

用全CLL和正常B细胞溶解物进行PI3K实验。 进行PI3K ELISA 实验。全细胞抽提物加到PI(4,5)P2 底物和反应 buffer（包含 ATP)的混合物中，在室温下温育。加入 PI(3,4,5)P3 探测器和 EDTA混合，反应终止，在室温下温育1小时。混合物转移到PI3K ELISA板上，再温育1小时。 冲洗反应板，然后和第二探测器再温育30分钟。再次冲洗反应板, 加入3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液 ，反应5分钟，加入H2SO4 终止反应。在450纳米处读数。

细胞实验

Cell lines: CLL B 细胞或健康志愿者的T细胞或NK细胞

Concentrations: 0.01-100 μM

Incubation Time: 48小时

Method: 进行MTT实验测定细胞毒性。1×105个细胞和CAL-101一起温育。加入MTT试剂, 再次温育20小时，然后用溶于PBS的硫酸鱼精蛋白冲洗。加入DMSO, 用分光光度计在540纳米处测定吸光度。使用膜联蛋白/PI液式细胞计检查在不同时间点测定细胞存活力，分析数据。每个样本至少计数104个细胞。以全部阳性细胞与未处理细胞之比百分数的形式来表示实验结果。加入100 μM Z-VAD检测caspase-依赖的细胞凋亡。加入 1 μg/mL CD40L, 800 U/mL IL-4, 50 ng/mL BAFF, 20 ng/mL TNF-α测定存活信号, 或者共培养在纤连蛋白或 HS-5 细胞系基质包被的板上。 基质共培养 在75cm2培养瓶 (80%-100% 融合率) 培养24 小时，然后加入CLL细胞。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Lannutti BJ, et al. Blood, 2011, 117(2), 591-594.

[2] Herman SE, et al. Blood, 2010, 116(12), 2078-2088.

[3] Meadows SA, et al. Blood, 2011 Dec 30.